Ex Cultura Vivo del tessuto del paziente e l'esame di consegna Gene
Summary
Questo articolo descrive la cultura di fette di tessuto dei pazienti per studi di consegna dei geni e successiva analisi di espressione genica utilizzando l'imaging bioluminescenza IVIS.
Abstract
Questo video descrive l'uso del tessuto paziente come un modello ex vivo per lo studio della consegna del gene. Tessuto paziente fresche ottenute al momento della chirurgia è affettata e mantenute in coltura. L'ex sistema modello in vivo consente la consegna fisica dei geni nel tessuto del paziente intatta e l'espressione genica viene analizzato per immagini bioluminescenza utilizzando il sistema di rilevazione IVIS. Il sistema di rilevamento bioluminescenti dimostra quantificazione rapida e accurata di espressione genica in singole sezioni, senza la necessità del sacrificio dei tessuti. Questo tessuto del sistema fetta cultura può essere utilizzato in una varietà di tipi di tessuto tra tessuto normale e maligna e ci permette di studiare gli effetti della natura eterogenea del tessuto intatto e l'alto grado di variabilità tra singoli pazienti. Questo modello di sistema potrebbe essere usato in certe situazioni, come alternativa ai modelli animali e come modalità complementare preclinici prima di entrare in sperimentazione clinica.
Protocol
Discussion
Descriviamo un ex paziente vivo metodo di coltura e sistema di rilevazione bioluminescenti per la valutazione di consegna del gene non fisse all'interno dei tessuti umani. Il metodo offre un modo semplice e riproducibile di fette di tessuto coltura. Ha un potenziale significativo in quanto consente lo studio della consegna gene in intact tessuti umani, l'analisi di consegna del gene in una varietà di tessuti umani, compreso il tessuto maligno e in grado di fornire importanti informazioni sugli…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato attraverso il Cork Sud Infermeria fondo Victoria University Hospital con il seno, il Cancer Society irlandese (CRI07TAN) e il Cancer Centre Cork Research. Replica incompetenti ricombinante adenovirus 5 particelle sotto il controllo trascrizionale del promotore di CMV è stata un dono gentile del Prof. Andrew Baker, Università di Glasgow.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | ||
| Firefly Luciferin | Biosynth, Switzerland | |||
| Dermabond | Johnson & Johnson | |||
| Vibrotome | Leica microsystems | VT 1000 A |
References
- van de Bovenkamp, M., Groothuis, G. M., Draaisma, A. L., Merema, M. T., Bezuijen, J. I., van Gils, M. J. Precision-cut liver slices as a new model to study toxicity-induced hepatic stellate cell activation in a physiologic milieu. Toxicol Sci. 85, 632-638 (2005).
- Speirs, V., Green, A. R., Walton, D. S., Kerin, M. J., Fox, J. N., Carleton, P. J. Short-term primary culture of epithelial cells derived from human breast tumours. Br J Cancer. 78, 1421-1429 (1998).
- Kirby, T. O., Rivera, A., Rein, D., Wang, M., Ulasov, I., Breidenbach, M. A novel ex vivo model system for evaluation of conditionally replicative adenoviruses therapeutic efficacy and toxicity. Clin Cancer Res. 10, 8697-8703 (2004).
- Josserand, V., Texier-Nogues, I., Huber, P., Favrot, M. C., Coll, J. L. Non-invasive in vivo optical imaging of the lacZ and luc gene expression in mice. Gene Ther. 14, 1587-1593 (2007).
