In utero Intraventrikulär direktinsprutning och elektroporation av E15 musembryon

Abstract

In utero in vivo injektion och elektroporation av embryonala musen hjärnbarken ger ett kraftfullt verktyg för manipulering av enskilda stamceller kantar väggarna i den laterala ventrikeln. Denna teknik är nu allmänt används för att studera processer som corticogenesis av över-uttrycka sig eller knackar ner gener och observera effekter på cellulär proliferation, migration och differentiering. I jämförelse med traditionella knockout strategier, ger in utero elektroporering ett snabbt sätt att manipulera en befolkning av celler under en viss tidsmässig fönster. I den här videon protokollet redogör vi för den experimentella metoden för att förbereda möss för operation, utsätta livmodern hornen genom laporatomy, injicera DNA i den laterala ventriklarna av det utvecklande embryot, electroporating DNA i stamceller som kantar laterala väggen, och ta hand om djur efter operationen . Vårt laboratorium använder detta protokoll för operationer på E13-E16 möss, är det dock oftast utförs på E15, vilket visas i denna video.