تنقية DNA البلازميد من المستعمرات البكتيرية باستخدام Miniprep Qiagen كيت

Abstract

تنقية البلازميد الحمض النووي من كولاي هو تقنية أساسية لالاستنساخ الجزيئي. تنقية صغيرة الحجم (miniprep) من أقل من 5 مل من ثقافة الجرثومي هو وسيلة سريعة للتحقق منها استنساخ الحمض النووي أو العزلة ، تليها ردود الفعل الأنزيمية أخرى (بوليميريز سلسلة من ردود الفعل وتقييد انزيم الهضم). هنا ، ونحن الفيديو المسجلة الإجراءات العامة من خلال miniprep QIAGEN في QIAprep كيت Miniprep 8 ، التي تهدف إلى إدخال هذه التقنية عالية الكفاءة للمبتدئين العامة لتقنيات البيولوجيا الجزيئية. ويستند هذا الإجراء كله على تحلل الخلايا القلوية كولاي تليها الامتزاز من الحمض النووي على السيليكا في وجود الملح العالية. وتتكون من ثلاث خطوات : 1) إعداد وتبادل المعلومات من lysate البكتيرية ، 2) الامتزاز من الحمض النووي على الغشاء QIAprep ، 3) الغسيل وشطف من الحمض النووي البلازميد. يتم تنفيذ كافة الخطوات دون استخدام الكلوروفورم ، والفينول ، CSCL ، إيثيديوم بروميد ، ودون هطول الأمطار الكحول. وعادة ما يستغرق أقل من 2 ساعة لإنهاء الإجراء بأكمله.