Um protocolo otimizado para o isolamento de células-tronco a partir da glândula salivar do mouse é descrito. O método emprega digestão enzimática e mecânica, e permite o isolamento de salispheres contendo células com características de células-tronco.
Madura glândulas salivares de origem humana e do rato compreendem um mínimo de cinco tipos de células, cada qual facilita a produção e excreção de saliva na cavidade oral. Células acinares serosas e as mucosas são as proteínas e fábricas que produzem muco da glândula, respectivamente, e representam a origem da produção de saliva. Uma vez sintetizados, os vários enzimática e outros componentes proteicas de saliva são secretados por uma série de células epiteliais ductais rolamentos do tipo morfologia, até que a eventual expulsão da saliva através de um duto grande para a cavidade da boca. A composição da saliva também é modificado pelas células ductais durante este processo.
Na manifestação de doenças como a síndrome de Sjögren, e em algumas situações clínicas, tais como o tratamento de radioterapia para câncer de cabeça e pescoço, a produção de saliva pelas glândulas é drasticamente reduzido 1,2. A xerostomia resultante, uma sensação subjetiva de boca seca, afeta não só a capacidade do paciente de engolir e falar, mas também incentiva o desenvolvimento de cárie dentária e pode ser socialmente debilitante para o sofredor.
A restauração da produção de saliva nas condições acima mencionadas clínica, portanto, representa uma necessidade não atendida clínica, e, como tal, vários estudos têm demonstrado a capacidade de regeneração das glândulas salivares 3-5. Mais para o isolamento de células-tronco como as populações de células de vários tecidos dentro do mouse e corpos humanos 6-8, temos mostrado usando o método descrito que as células-tronco isoladas das glândulas salivares do mouse pode ser usado para resgatar a produção de saliva na salivares irradiadas glândulas 9,10. Esta descoberta abre o caminho para o desenvolvimento de células-tronco terapias baseadas no tratamento de condições xerostomic em seres humanos, e também para a exploração da glândula salivar como um microambiente contendo células multipotentes com capacidades de auto-renovação.
O método de cultura de tecidos descrito aqui representa um protocolo reprodutível para o isolamento de células-tronco contêm salispheres das glândulas salivares de ratos. Estudos utilizando células isoladas desta forma têm destacado a capacidade regenerativa das células da glândula salivar-tronco 9. Transplante de uma centena de células + c-Kit derivado do salispheres induzida a recuperação funcional das glândulas salivares de ratos irradiados. Estes dados são estimulantes e fornecer um ponto de partida para a investigação de células-tronco para terapia baseada xerostomia. Muitos caminhos ainda precisam ser exploradas no entanto, incluindo a plena perfil de expressão do marcador de proteína das células-tronco, a capacidade das glândulas submandibulares de resgatar a função das glândulas salivares parótidas irradiadas e vice-versa, ea caracterização da suposta in vivo nicho de células-tronco de as células. Em última análise, a tradução deste protocolo para amostras de tecido humano eo potencial subseqüente para o tratamento da xerostomia em pacientes humanos utilizando células isoladas é a aplicação mais empolgante do método descrito.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |