Summary

प्रसव के बाद मस्तिष्क में एक उच्च संकल्प Neuronal प्रवासन के समय चूक इमेजिंग के लिए Organotypic स्लाइस परख

Published: December 11, 2010
doi:

Summary

यह एक organotypic टुकड़ा परख प्रसवोत्तर और व्याख्यान चबूतरे वाला प्रवासी धारा में उच्च संकल्प neuroblast प्रवास के समय चूक इमेजिंग मस्तिष्क के लिए अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.

Abstract

पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं, neuroblasts के प्रवास के रूप में के रूप में अच्छी तरह से भेदभाव और तंत्रिका सर्किट मौजूदा में नए न्यूरॉन्स के एकीकरण के प्रसार: प्रसव के बाद मस्तिष्क में Neurogenesis तीन जैविक घटनाओं के रखरखाव पर निर्भर करता है. घ्राण बल्ब में प्रसवोत्तर neurogenesis के लिए, इन घटनाओं को तीन anatomically अलग डोमेन के भीतर अलग – अलग हैं: प्रसार काफी हद तक पार्श्व ventricles के subependymal क्षेत्र (एसईजेड) में होता है, पलायन neuroblasts व्याख्यान चबूतरे वाला प्रवासी धारा (आरएमएस) के माध्यम से पार, और नए न्यूरॉन्स अंतर और घ्राण बल्ब (ओ) के भीतर एकीकृत. तीन डोमेन आदर्श प्लेटफॉर्म के रूप में सेवा करने के लिए सेलुलर, आणविक और शारीरिक तंत्र है कि जैविक घटनाओं में से प्रत्येक साफ़ विनियमित अध्ययन. यह कागज एक organotypic टुकड़ा प्रसव के बाद मस्तिष्क के ऊतकों के लिए अनुकूलित परख, जिसमें कोशिकी शर्तों निकट vivo वातावरण में neuroblasts पलायन करने के लिए नकल का वर्णन करता है. हम बताते हैं कि हमारे परख आरएमएस के भीतर neuroblasts की वर्दी, उन्मुख है, और तेजी से आंदोलन के लिए प्रदान करता है. यह परख अत्यधिक सेल अलग आनुवंशिक पृष्ठभूमि पर चूहों से पार प्रत्यारोपण दृष्टिकोण का उपयोग करके neuronal प्रवास के स्वायत्त और गैर स्वायत्त विनियमन के अध्ययन के लिए उपयुक्त हो जाएगा.

Protocol

मैं प्रक्रिया निम्नलिखित तकनीक बाँझ शर्तों के तहत प्रदर्शन किया जाना चाहिए, एक लामिना का प्रवाह हुड में, निष्फल उपकरण का उपयोग कर. गिलास नीचे व्यंजन के organotypic स्लाइस के लिए तैयार …

Discussion

आरएमएस में neuronal प्रवास घ्राण एक बल्ब में एक प्रसवोत्तर neurogenesis के आवश्यक घटक है. प्रवासन आरएमएस के माध्यम से मस्तिष्क की सतह के लिए एक स्पर्शरेखा विमान में होता है. Tangentially पलायन neuroblasts त्रिज्यात उनके पूर्व?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

हम वीडियो में प्रोटोकॉल narrating के लिए दान McWhorter धन्यवाद. यह काम NIH अनुदान 5R01NS062182, एजिंग रिसर्च के लिए अमेरिकन फेडरेशन से एक अनुदान, और संस्थागत HTG के लिए सम्मानित किया गया धन के द्वारा समर्थित है.

References

  1. Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet. Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).
  2. Valiente, M., Marin, O. Neuronal migration mechanisms in development and disease. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).
  3. Rakic, P. Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology. Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).
  4. Jaglin, X. H., Chelly, J. Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects. Trends Genet. 25, 555-566 (2009).
  5. Carro, M. S. The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours. Nature. 463, 318-325 (2010).
  6. Wu, W. Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit. Nature. 400, 331-336 (1999).
  7. Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, . The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone. Neuron. 16, 735-743 (1996).
  8. Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. a. n. u. e. l., Alvarez-Buylla, J., &amp, A., Koretsky, A. P. Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain. Neuroimage. , (2006).
  9. Vreys, R. MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies. Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).
  10. Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain. Chem. Senses. 30, 115-116 (2005).
  11. Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal. J. Vis. Exp. , (2010).
  12. Shen, Q. Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions. Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).
  13. Tavazoie, M. A specialized vascular niche for adult neural stem cells. Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).
  14. Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain. Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).
  15. Polleux, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Ghosh, A. The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal. Sci. STKE. , L9-L9 (2002).
  16. Murase, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Horwitz, A. F. Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream. J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).
  17. Suzuki, S. O. &. a. m. p. ;. a. m. p., Goldman, J. E. Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration. J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).
  18. Ghashghaei, H. T. The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).
  19. Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. Major signaling pathways in migrating neuroblasts. Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).
  20. Jacquet, B. V. Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors. Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).
check_url/kr/2486?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Jacquet, B. V., Ruckart, P., Ghashghaei, H. T. An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain. J. Vis. Exp. (46), e2486, doi:10.3791/2486 (2010).

View Video