Органотипической Анализ фрагментов для высокого разрешения Time-Lapse Визуализация миграции нейронов в послеродовой мозга
Summary
Этот протокол описывает органотипической анализа ломтик оптимизирован для послеродового мозга и высоким разрешением, замедленная съемка нейробластов миграции в ростральной миграционных потоков.
Abstract
Нейрогенез в послеродовом мозга зависит от поддержания трех биологических мероприятий: распространение клеток-предшественников, миграцию нейробластов, а также дифференциации и интеграции новых нейронов в существующие нейронные цепи. Для послеродового нейрогенез в обонятельной луковицы, эти события были разделены в течение трех анатомически различных областях: распространение в значительной степени происходит в subependymal зоны (ОЭЗ) боковые желудочки, миграции нейробластов пройти через ростральной миграционных потоков (RMS), а также новые нейроны дифференцировать и интегрировать в обонятельные луковицы (OB). Трех областей служат идеальной платформой для изучения клеточном, молекулярном и физиологических механизмов, которые регулируют каждое из биологических событий отчетливо. Эта статья описывает органотипической анализа ломтик оптимизирован для послеродового ткани мозга, в котором внеклеточных условиях, максимально имитирующие в естественных условиях среды для миграции нейробластов. Мы показываем, что наш анализ обеспечивает равномерное, ориентированной, и быстрое движение нейробластов в RMS. Этот анализ будет весьма подходящим для исследования клеточных автономных и неавтономных регулирования миграции нейронов, используя кросс-трансплантации подходов от мышей на разных генетических фон.
Protocol
Discussion
Миграцию нейронов в RMS является важным компонентом постнатального нейрогенез в обонятельной луковицы 1. Миграция через RMS происходит в плоскости, касательной к поверхности мозга. Касательной миграции нейробластов отличаются от радиально мигрирующих клеток по месту нахождения с…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Дэн Мак-Ухортер для повествующая протокол в видео. Эта работа проводится при поддержке гранта NIH 5R01NS062182, грант от Американской федерации по проблемам старения исследований и институциональных фондов присуждена HTG.
References
- Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet. Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).
- Valiente, M., Marin, O. Neuronal migration mechanisms in development and disease. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).
- Rakic, P. Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology. Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).
- Jaglin, X. H., Chelly, J. Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects. Trends Genet. 25, 555-566 (2009).
- Carro, M. S. The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours. Nature. 463, 318-325 (2010).
- Wu, W. Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit. Nature. 400, 331-336 (1999).
- Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, . The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone. Neuron. 16, 735-743 (1996).
- Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. a. n. u. e. l., Alvarez-Buylla, J., &, A., Koretsky, A. P. Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain. Neuroimage. , (2006).
- Vreys, R. MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies. Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).
- Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain. Chem. Senses. 30, 115-116 (2005).
- Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal. J. Vis. Exp. , (2010).
- Shen, Q. Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions. Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).
- Tavazoie, M. A specialized vascular niche for adult neural stem cells. Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).
- Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain. Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).
- Polleux, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Ghosh, A. The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal. Sci. STKE. , L9-L9 (2002).
- Murase, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Horwitz, A. F. Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream. J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).
- Suzuki, S. O. &. a. m. p. ;. a. m. p., Goldman, J. E. Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration. J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).
- Ghashghaei, H. T. The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).
- Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. Major signaling pathways in migrating neuroblasts. Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).
- Jacquet, B. V. Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors. Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).
