Un ensayo Cortar organotípicos de alta resolución de imágenes a intervalos de tiempo de la migración neuronal en el cerebro postnatal
Summary
Este protocolo describe un ensayo de corte organotípicos optimizado para el cerebro postnatal y de alta resolución de imágenes a intervalos de tiempo de la migración de los neuroblastos en la corriente migratoria rostral.
Abstract
Neurogénesis en el cerebro postnatal depende del mantenimiento de los tres eventos biológicos: la proliferación de las células progenitoras, la migración de los neuroblastos, así como la diferenciación y la integración de nuevas neuronas en circuitos neuronales ya existentes. Para la neurogénesis postnatal en los bulbos olfatorios, estos eventos están separados en tres áreas anatómicamente diferentes: la proliferación en gran medida se produce en la zona subependimaria (ZEE) de los ventrículos laterales, la migración de los neuroblastos recorrer a través de la corriente migratoria rostral (RMS), y las nuevas neuronas se diferencian y integrar dentro de los bulbos olfatorios (OB). Los tres dominios de servir como plataformas ideales para estudiar los mecanismos celulares, moleculares y fisiológicos que regulan cada uno de los eventos biológicos claramente. Este artículo describe un ensayo de corte organotípicos optimizado para el tejido cerebral post-natal, en el que las condiciones extracelular imitan el ambiente in vivo para la migración de los neuroblastos. Se demuestra que nuestro ensayo permite el movimiento uniforme, orientado y rápida de los neuroblastos en el RMS. Este ensayo será muy adecuado para el estudio de la regulación de las células autónomas y no autónomas de la migración neuronal mediante el uso de trasplante cruzado enfoques de ratones en diferentes fondos genéticos.
Protocol
Discussion
La migración neuronal en el RMS es un componente esencial de la neurogénesis postnatal en los bulbos olfatorios 1. La migración a través de la RMS se produce en un plano tangente a la superficie del cerebro. Neuroblastos tangencialmente la migración son diferentes de forma radial migración de las células basadas en la ubicación de la fuente de progenitores, así como el destino divergente de sus productos finales neuronal 1, 2, 3. La población relativamente pura de células que migran tang…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Dan McWhorter para narrar el protocolo en el video. Este trabajo es apoyado por el NIH subvención 5R01NS062182, una beca de la Federación Americana para la Investigación sobre el Envejecimiento, y los fondos institucionales otorgados a HTG.
References
- Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet. Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).
- Valiente, M., Marin, O. Neuronal migration mechanisms in development and disease. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).
- Rakic, P. Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology. Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).
- Jaglin, X. H., Chelly, J. Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects. Trends Genet. 25, 555-566 (2009).
- Carro, M. S. The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours. Nature. 463, 318-325 (2010).
- Wu, W. Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit. Nature. 400, 331-336 (1999).
- Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, . The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone. Neuron. 16, 735-743 (1996).
- Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. a. n. u. e. l., Alvarez-Buylla, J., &, A., Koretsky, A. P. Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain. Neuroimage. , (2006).
- Vreys, R. MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies. Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).
- Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain. Chem. Senses. 30, 115-116 (2005).
- Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal. J. Vis. Exp. , (2010).
- Shen, Q. Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions. Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).
- Tavazoie, M. A specialized vascular niche for adult neural stem cells. Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).
- Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain. Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).
- Polleux, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Ghosh, A. The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal. Sci. STKE. , L9-L9 (2002).
- Murase, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Horwitz, A. F. Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream. J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).
- Suzuki, S. O. &. a. m. p. ;. a. m. p., Goldman, J. E. Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration. J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).
- Ghashghaei, H. T. The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).
- Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. Major signaling pathways in migrating neuroblasts. Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).
- Jacquet, B. V. Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors. Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).
