1. Mouse-múltiplos in vivo Brain Imaging: Quando os animais imagens ao vivo, várias características-chave devem estar presentes durante toda a sessão de imagens: 1) um método seguro de anestesia, 2) de controle ambiental e 3) monitoração fisiológica. Além disso, os indivíduos quando imagens múltiplas em simultâneo, não são adicionados complexidades em relação a facilidade ea rapidez da preparação e da reprodutibilidade das posições animal para facilitar o registo de imagem. Conseqüentemente, três grandes componentes personalizados foram projetados e fabricados: a carga do sistema para inserir os ratos em bobinas de RF dentro da ressonância magnética, uma câmara de indução para facilitar a preparação e uma plataforma com monitoramento integrado leva para padronizar posição. O Sistema de carregamento: O sistema de carregamento do rato consiste de duas partes principais: o 'mouse hive' eo 'array de carga ". Função principal da colméia do mouse é posicionar sete bobinas Millipede RF (RMN Varian Systems, Palo Alto, CA) em uma matriz hexagonal dentro do magneto furo. A matriz de carregamento é projetado para manter e transportar vários mouses alojados em 50 tubos de centrífuga mililitro com furos através de suas dicas para permitir a entrada de gás anestésico. Depois de os ratos são anestesiados e interface com o equipamento de monitoramento em uma área de preparação nas proximidades do ímã, eles são inseridos os tubos de centrifugação modificado e montado sobre a matriz de carga. Depois de montar todos os ratos, a matriz de carga é transportada e inserido no ímã e posicionados em um sistema ferroviário. O sistema ferroviário permite que a matriz casal com a colméia do mouse quando pressionado para baixo o furo do ímã. Quando estiver totalmente inserido no ímã, a centrífuga doca tubos para o sistema de entrega de anestésico dentro das bobinas de RF. Isoflurano misturado com o oxigênio é fornecido a partir do final hive do mouse com o modelo através de um tubo ao longo do eixo de cada bobina individual. Esta mistura de gás anestésico fluxos dentro dos tubos, passando a ratos e é recolhido por uma unidade ativa limpeza conectado à parte traseira do conjunto de carga (Figura 1). A Câmara de indução: Desde os tempos de imagem pode demorar até três horas, minimizando o tempo de preparação de animais é fundamental para limitar a exposição dos camundongos à anestesia. Por isso, temos desenvolvido uma câmara de indução personalizado para agilizar o processo de preparação (Figura 2). A câmara de indução personalizado cria um ambiente único para indução e manipulação de vários mouses. Construído a partir de acrílico transparente, as características de indução de câmara fecho rápido portas silicone iris para minimizar as fugas de anestesia e permite ao usuário acessar o ambiente interno sem a necessidade de luvas especiais. Em comparação com máscara convencional e circuitos para um único rato, a câmara de indução é grande o suficiente para abrigar até vinte ratos e permite a manipulação livre dos ratos sem o anexo de tubos pesados e máscaras. A unidade é fornecida com um fluxo constante de gás anestésico, que é coletado através de um sistema passivo de limpeza. Elementos de aquecimento resistivos são usados para aquecer o chão da câmara para manter a temperatura corporal dos animais durante a preparação. O Trenó: Um dos aspectos mais difíceis e demorados de se preparar para os ratos de ressonância magnética são a aplicação de eletrocardiograma (ECG) eletrodos e sondas de temperatura retal. Além disso, muitos dos eletrodos convencionais, como o manguito e eletrodos de agulha, foram encontrados para distorcer a postura do animal, dificultando a padronização de posicionamento. Por isso, planejamos uma plataforma de posicionamento personalizado forma de embutidos equipados com ECG, respiração e sondas de temperatura chamado de "trenó" (Patente dos EUA 7.146.936) (Figura 3). Restrições de movimento feito de fechos de velcro foram usados para limitar o movimento da cabeça. Mouse-em etapas múltiplas de imagem in vivo do cérebro: Todas as pesquisas locais mouse requer ACC (Comitê Animal Care), a aprovação IACUC (Animal Care Institucional e Comitê Use) ou equivalente para os procedimentos de manuseio do mouse. Todos os procedimentos, tais como identificação e pesagem dos animais deve ser realizada sob um Gabinete de Segurança Biológica (CSB) e na Unidade de ressonância magnética. Os animais são transferidos para um recipiente de plástico autoclavável e transportados para a câmara de indução de ressonância magnética. Os ratos são anestesiados em uma câmara de indução pré-aquecida com 4% de isoflurano e 4 L / min de oxigênio. Os animais são completamente anestesiados, uma vez que não respondem ao pinch pata. Pêlo do peito é removido através de um removedor de pêlos (NAIR) se necessário para proporcionar um melhor contato com ECG e dispositivos de monitoramento de temperatura que foram construídas em um trenó personalizado. Eve salve (Lágrimas Naturale PM) é aplicada para os olhos para evitar a secagem, e aproximadamente 0,3 mL de solução salina é administrada por via subcutânea para manter a hidratação. Gd-DTPA-BMA (Omniscan) podeser usado se realce de contraste é desejada. Se Gd-DTPA é para ser usado, ele vai ser diluído em soro fisiológico (volume final 300uL) e administrado em uma dose única de 1 mmol / kg antes da sessão de MR via IP. Os ratos são depois carregados em trenós individuais, imobilizados com tiras de cabeça e deslize em open-ended tubo cônico 50mL (Figura 3). Até 7 camundongos vivos podem ser digitalizados em uma hora. Uma vez que todos os animais são carregados com monitoração fisiológica conectado, defina o nível de isoflurano no ímã furo a 2% eo nível de oxigênio a 8 L / min. Os tubos cônicos são montados em um sistema de encaixe (Figura 1) projetado para ratos posição uniformemente em cada bobina RF posicionado no centro do magneto furo. Uma vez carregado, o isoflurano pode ser reduzida a 0,9-2%. ECG e temperatura são monitoradas em cada animal durante todo o curso da verificação. Os animais são mantidos aquecidos durante o curso da verificação com o ar aquecido. A duração de cada scan tridimensional é de aproximadamente 3 horas. Os detalhes são os seguintes: spin echo rápido com TR de 2300 ms e um TEeff de 36 ms. Echo comprimento do comboio de 8 com uma média. Resolução de imagem resultante é de 125 mM (Figura 4). Quando a pesquisa estiver concluída, os animais são removidos do ímã e descarregado em uma câmara de indução morna preenchido com oxigênio a 100%. Os animais são transferidos para um recipiente de plástico selado e transportado em um BSC. Eles são colocados em uma gaiola projecto quente livre e permitiu a recuperação da anestesia. 2. Múltipla do mouse ex Brain Imaging vivo: Afetado por artefatos de movimento, fixa RM atinge resolução maior do que imagens ao vivo. De alta resolução, tridimensional conjuntos de dados oferecem flexibilidade máxima na extração de informações quantitativas e permitir a análise de imagem automática. Uma matriz bobina personalizado RF foi desenvolvido para a aquisição de 16 conjuntos de dados paralela de alta resolução de MR-crânio fixado em cérebros de camundongos durante a noite sessões de digitalização. Os 16 ex-Coil vivo Matriz Brain Imaging: A custom-built conjunto solenóide 16-coil foi criado à imagem de 16 amostras simultaneamente. Este projeto aperfeiçoa um protótipo anteriormente utilizado para a imagem de três amostras simultaneamente em um conjunto de 60 milímetros inserir gradiente. As bobinas de 8 turn-solenóides são mais de feridas nas extremidades para fornecer sensibilidade uniforme dentro de 10% em relação a um comprimento de 26 milímetros e são blindados individualmente dentro de compartimentos modulares (Idziak e Haeberlen, 1982). Os 16 compartimentos da bobina são montados em um frame (Figura 5), que posiciona as bobinas dentro do gradiente e grampos no lugar usando uma bexiga pneumática para minimizar o movimento. Múltipla do mouse ex vivo de imagens do cérebro passos: Cavidade torácica aberta e inserir a agulha (ou Segurança de perfusão Winged, 25G X 3 / 4) para o ventrículo esquerdo do coração de um rato anestesiado (via injeção intraperitoneal de cetamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) . Corte a aurícula direita. Transcardíaca perfusão nivelado com 30 quartos temporários mL PBS 1 X + 1 mL / mL de heparina (1000 unidades USP / mL) + ProHance mM 2 a uma vazão de aproximadamente 100 mL / hr. Passar fixação com 30 mL PFA 4% (temperatura ambiente) + ProHance mM 2 em 100 mL / hr. Decapitar e remover a pele, mandíbula, orelhas, ponta do nariz cartilaginoso. Coloque estrutura craniana restantes em 4% PFA + ProHance mM 2 overnight a 4 ° C. Transferência para 1X PBS + 0,02% de azida de sódio + ProHance mM 2. De alta resolução de varredura três dimensões de ressonância magnética em 7 Tesla ocorre entre 4 dias e não superior a 2,5 meses após a perfusão. Cérebros são colocados em uma matriz de bobina de 16 canais solenóide (Figura 5). Parâmetros de imagem são os seguintes: spin echo rápido com TR 325 ms e um de 30 ms TEeff comprimento do comboio, echo de 6 com 4 médias. As imagens finais têm uma resolução isotrópica de 32 mM (Figura 6) ea duração da verificação é de aproximadamente 12 horas. Após a digitalização, coloque o crânio em formalina a 10% + 2 ProHance mM para a preservação. 3. Resultados representativos: Figura 1. O sistema de carregamento mouse. A "matriz de carga" e "mouse colméia" conectado com um sistema comum de fibra de vidro ferroviário. Figura 2. A câmara de indução. Figura 3. A) O trenó, mostrando sensores de monitoramento integrado e apoio de cabeça. b) Um rato anestesiado em um trenó com o apoio de cabeça em anexo. O conjunto de trenó desliza facilmente para dentro do tubo de centrífuga. Figura 4. </strong> Representante in vivo imagens múltiplas do cérebro de um scan 3 horas tridimensional. Figura 5. 16 canais série bobina para a digitalização de 16 amostras do cérebro fixo. Figura 6. Imagem do cérebro Representante ex-vivo.
