の解剖と染色ショウジョウバエ幼虫卵巣
Summary
開発時にどのようにニッチと幹細胞の形態は、実用的な意味を持つ重要な問題です。の<em>ショウジョウバエ</em>卵巣、生殖系列幹細胞とその細胞のニッチは、幼虫の発育中に形成する。このビデオでは、後期三齢（LL3）から女性の生殖腺を、解剖染色およびマウントする方法を示しています<em>ショウジョウバエ</em>幼虫。
Abstract
多くの臓器は、胚発生時と成人期の間にメンテナンスや修理のための彼らの開発のための幹細胞に依存する。どのように幹細胞形態、およびそれらがどのようにその環境と相互作用を理解することは、開発、ホメオスタシスと疾患を理解するため、非常に重要です。 ショウジョウバエの卵巣は、彼らの体細胞の支持細胞（ニッチ）1、2の生殖系列幹細胞（GSCs）の相互作用のための有力なモデルを務めている。遺伝的にそれらを操作する能力に結合ニッチの既知の場所とGSCsは、研究者は幹細胞とそのニッチ3月12日の間の相互作用の様々な解明することができました。
GSCメンテナンスと分化の制御機構に関する豊富な情報にもかかわらず、比較的少ないがGSCsとその体細胞のニッチは、開発中に形成する方法については知られている。その細胞成分の端末フィラメントとキャップの細胞（図1）、第三幼虫齢13から17の間にフォームを含む約18体細胞ニッチ、。 GSCsは、始原生殖細胞（始原生殖細胞）に由来する。 PGCは初期の幼虫の段階で増殖するが、ニッチの形成に続いて始原生殖細胞のサブグループはGSCs 7、16、18、19になります。一緒に、体細胞のニッチ細胞とGSCsは、生物の生涯を通じて卵を生成する機能的なユニットを作る。
GSCユニットの形成に関する多くの質問が未回答のままである。このようなニッチと幹細胞の前駆体の前駆細胞間の調整、またはそれらがGSCsになると始原生殖細胞内の非対称性の生成などのプロセスは、最善の幼虫で検討することができます。しかし、幼虫の卵巣の開発の方法論の研究は、物理的に困難です。最初に、幼虫の卵巣は小さくなります。であっても後期幼生の段階で彼らは、全体で唯一の100μmのです。さらに、卵巣は透明で、白い脂肪体に埋め込まれています。ここでは、蛍光抗体で染色することによってこの後に続く三齢（LL3） ショウジョウバエの幼虫、から卵巣を分離するためのステップバイステップのプロトコルについて説明します。我々はそのような、卵巣の位置をシンクしていない組織を染色し、洗浄し、抗体が組織に浸透することを確認してなどの問題に対していくつかの技術的ソリューションを提供しています。このプロトコルは、以前の幼虫の段階にとだけでなく、幼虫の精巣に適用することができます。
Protocol
Discussion
このビデオでは、後期三齢幼虫卵巣の単離と染色プロトコルを示しています。日常的にかつ確実にこのプロトコルを実行するには、注意が以下の点に注意を払う必要があります。
- 同期とよく発達した幼虫の場合は、上の混雑を避ける必要があります。
- 小さな半透明の卵巣の損失を避けるために、脂肪体はそのまま分析することを確認してください。また、これは（第2または?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
IMは、マリーキュリーの再統合の助成金によってサポートされています。この作品は、イスラエルの科学基金グラントのないによってサポートされていました。 1146年から1108年、ヘレンと幹細胞科学のワイツマン研究所での研究とLeir慈善基金のためのマーティンキメル研究所による。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NaCl | J.T.Baker | |||
| Kcl | Merck | |||
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
| MgCl2 | Merck | |||
| Sucrose | J.T.Baker | |||
| Hepes | Sigma-Aldrich | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | |||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
| Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
| Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
| s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| 9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
| Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
| 6 well plates | Costar | 3516 | ||
| Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
| Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
| Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
| Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
| 1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
| Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
| Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
| Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |
References
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