Un modo rapido, robusto di isolare vitali cellule staminali epiteliali adulte di pelle umana è descritta. Il metodo utilizza la digestione enzimatica della matrice di collagene della pelle, seguita da spiumatura dei follicoli piliferi e l'isolamento delle sospensioni singola cella o frammenti di tessuto per la coltura cellulare.
L'omeostasi di tutti i tessuti e auto-rigenerante dipende da cellule staminali adulte. Mentre le cellule staminali indifferenziate subire divisioni asimmetriche, che generano cellule figlie che mantengono il fenotipo delle cellule staminali e di transito-amplificazione cellule (cellule TA) che migrano dalla nicchia delle cellule staminali, subiscono rapida proliferazione e differenziazione terminale per ripopolare il tessuto.
Le cellule staminali epiteliali sono state identificate nell'epidermide, follicolo pilifero, e intestino come cellule con un alto potenziale proliferativo in vitro e come slow-ciclismo-label mantenendo le cellule in vivo 1-3. Adulti, tessuto-specifiche cellule staminali sono responsabili della rigenerazione dei tessuti in cui risiedono durante il normale turnover fisiologico, così come durante periodi di stress 4-5. Inoltre, le cellule staminali sono generalmente considerati più potenti, che hanno la capacità di dare origine a più tipi di cellule all'interno del tessuto 6. Per esempio, roditori cellule staminali dei follicoli dei capelli in grado di generare epidermide, ghiandole sebacee e follicoli piliferi 7-9. Abbiamo dimostrato che le cellule staminali dall'umano regione rigonfiamento follicolo pilifero mostra multi-potenzialità 10.
Le cellule staminali sono diventate uno strumento prezioso nella ricerca biomedica, per la loro utilità come un sistema in vitro per lo studio della biologia dello sviluppo, la differenziazione, tumorigenesi e per la loro possibile utilità terapeutica. E 'probabile che le cellule staminali epiteliali adulte sarà utile nel trattamento di malattie come la displasia ectodermica, monilethrix, Netherton sindrome, malattia di Menkes, epidermolisi bollosa ereditaria e alopecia 11-13. Inoltre, altri problemi della pelle come ad esempio ustioni, ferite e le ulcere croniche potranno beneficiare di terapie con cellule staminali legate 14,15. Dato il potenziale per la riprogrammazione delle cellule adulte in uno stato pluripotenti (cellule iPS) 16,17, il facilmente accessibile ed espandibile cellule staminali adulte di pelle umana può fornire una preziosa fonte di cellule per la terapia di induzione e a valle per una vasta gamma di malattie tra cui diabete e morbo di Parkinson.
I metodi di estrazione delle cellule e la cultura descritti sono sorprendentemente facili e riproducibili. Abbiamo generato epiteliali colture di cellule staminali da decine di individui in una vasta gamma d'età, inclusi i pazienti con difetti della pelle ereditaria 18. E 'meglio iniziare il processo il giorno della raccolta dei tessuti, tuttavia cellule rimangono vitali nel multimediale su ghiaccio per diversi giorni, facilitando la spedizione notte, se necessario. Pelle lifting scartato rendimenti …
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è finanziato dal NIH / NCI concedere R01CA-118916
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | GIBCO | 11995 | ||
Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
Insulin | GIBCO | 12585 | ||
T3 | Sigma | T-2752 | ||
Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
Adenine | Sigma | A9795 | ||
Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]