Summary
Мышь маленькая модель трансплантации кишечника был признан в качестве важного инструмента для изучения mechanismes от иммунного отторжения и экран новых иммуносупрессивных препаратов. Однако эта модель ограничена в использовании, поскольку методы участие является чрезвычайно технически задача. Теперь введем изменение техники.
Abstract
С 1990 года развитие такролимуса основе иммунитета и улучшение хирургической техники, увеличился массив мощных иммуносупрессивных препаратов, профилактика инфекций, и подходящий выбор пациента помогли улучшить актуарных трансплантата и выживаемость пациентов ставки по всем видам кишечника трансплантации. У пациентов с необратимыми кишечной недостаточности и осложнений парентерального питания теперь должны регулярно рассматриваться для малых трансплантации кишечника. Тем не менее, показатели выживаемости при трансплантации тонкого кишечника не спешат улучшать сравнивает все более выгодно почек, печени, сердца и легких. Небольшой трансплантации кишечника-прежнему остается неудовлетворительным по сравнению с другими органами. Дальнейший прогресс зависит от более глубокого понимания иммунологии и физиологии трансплантата и могут в значительной мере способствовало животных моделях. Более широкое использование мыши маленькая модель трансплантации кишечника необходимо в исследовании иммунологии и физиологии трансплантации кишечника, а также эффективных методов в диагностике ранних отказа. Однако эта модель ограничена в использовании, поскольку методы участие является чрезвычайно технически сложной задачей. Мы разработали модифицированную технику. При принятии анастомоз воротной вены и нижней полой вены, два швов пребывания принимаются на вершине проксимальных и дистальных вершине нижней полой вены с получателем с портальной вены донора с. Левой стене нижней полой вены и воротной вены донора с закрыта с продолжением швы с внутренней стороны нижней полой вены после того, после одного узла с проксимальных пребывания вершине шва правой стенки нижней полой вены и портальной доноров с вены закрываются продолжает швов снаружи пещеры уступает поле с 10-0 швов. Этот метод проще, поскольку для выполнения анастомоза производится только на одной стороне нижней полой вены и 10-0 швов нужного размера, чтобы избежать кровотечения и тромбоз. В этой статье мы представить подробную информацию о технике в дополнение к видео.
Protocol
Подготовка доноров и малых урожая кишечника:
- Мышь ansetheized с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
- Долго средней линии брюшной надрез. Проксимальной тощей кишки, была идентифицирована и лигировали с 6-0 швов. Прикрепленный мезентериальных сосудов дистальнее тощей кишки галстук лигировали с 8-0 швов.
- Дистальной подвздошной кишки, была идентифицирована и лигировали с 6-0 швов. Прилагается суда брыжеечной дистальнее подвздошной кишки лигируют с 8-0 швов.
- Портал подвергается от окружающих жира и придает тканям, лигируют и разделен панкреатодуоденальной и селезеночной вен.
- Брюшной аорты и подвергается воздействию верхней брыжеечной артерии от окружающих тканей.
- 1 мл гепарина (10u/ml) вводится в нижней полой вены для гепаринизация.
- Воротной вены разделен на воротах печени и верхней брыжеечной артерии отделяется от аорты, в том числе Каррель участок аорты.
- Тощей кишки и подвздошной кишки делятся дистальнее связей. Тонкого кишечника удаляется, затем хранится при температуре 4 ° С в солевом растворе.
Получатель подготовки и трансплантации:
- Мышь ansetheized с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операции на местах.
- Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной марлей, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
- Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены подвергаются и лигировали с 10-0 швов.
- Проксимальной и дистальной лигатуры помещена вокруг аорты и нижней полой вены, соответственно.
- Венотомия выполнен в нижней полой вены реципиента с 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную воротной вены донора с микро-ножниц.
- Aortotomy выполнен в брюшной аорты получателя, 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную верхней брыжеечной артерии донора Каррель патч с микро-ножницы
- Разрезов брюшной аорты и нижней полой вены являются перфузии физиологическим раствором.
- Тонкого кишечника донора помещается на левой стороне живота получателя покрытие с марлей.
- Пребывание швы располагаются на вершине проксимальных и дистальных вершине получателя брюшной аорты с верхней брыжеечной донора патч Каррель артерии.
- Анастомоз в правой части брюшной аорты реципиента и верхней брыжеечной артерии донора Каррель патч завершен первый с продолжением швов.
- Два швов пребывания производится сначала в проксимальных и дистальных вершине вершине нижней полой вены получателя с порталом донора для анастомоз воротной вены донора и нижней полой вены получателя.
- Левой стене нижней полой вены и воротной вены донора закрыта с продолжением швов во внутренней нижней полой вены.
- После одного узла с проксимальных шва пребывания вершине, правой стенки нижней полой вены и воротной вены донора закрыта с продолжением швов снаружи нижней полой пещере.
- Тонкого кишечника донора не переходит к правой стороне живота получателя. Правой стенки брюшной аорты реципиента и верхней брыжеечной артерии донора анастомоза замкнутый продолжать швов.
- В конце концов анастомоза сделан, дистальной лигатуры удаляется сначала проверить, кровотечение из анастомоза.
- Если есть мало или нет кровотечение из анастомоза проксимальных лигатуры удаляется. Тонкого кишечника донора заполняется кровью немедленно; цвет тонкой кишки становится красным.
- Дистального конца трансплантата подвздошной кишки является anastomosed конца в сторону проксимального отдела тощей кишки получателя с непрерывным швом из 8-0 швов.
- Проксимальной тощей кишки от донора экстериоризируется как стомы и закреплены кожи на правой стороне брюшной стенки с четырьмя швами каждой стороны 8-0 швов.
- Кишечник возвращаются в брюшную полость и закрылся с 6-0 швов продолжаться.
- Получатель мыши помещается на теплое место. Через час, получатель восстанавливает.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Уникальный иммунный ответ после небольшого трансплантации кишечника была предметом обширных исследований с использованием маленькая модель трансплантации кишечника у мышей. Основные иммунологические реакции, такие как трансплантат против реакции, хозяин-против-трансплантат реакция, сочетание обеих реакций, хроническое отторжение и терпимости были задействованы. Почти все иммунодепрессанты доказанных или потенциальных клиническое значение, были проверены на их эффективность в маленькая модель трансплантации кишечника.
Мы модифицировали мышей небольшого технику трансплантации кишечника в нескольких направлениях для повышения эффективности и показатели эффективности:
- Внутри тонкого кишечника донора должны держать ясно и никаких калом слева.
- Край Каррель участок аорты верхней брыжеечной артерии должна быть разделена гладкой и одинакового размера с открытием брюшной аорты получателя.
- Не крутите воротной вены с верхней брыжеечной артерии, когда анастомозов воротной вены с нижней полой вены получателя. Поскольку портал вены длиннее верхней брыжеечной артерии.
- Тонкой кишки должен быть сделан на середине живота и держать верхней брыжеечной артерии и воротной вены в надлежащем напряженность, когда восстановить циркуляцию крови, чтобы избежать тромбоза.
- Верхней брыжеечной артерии должны держать правильное напряжение, когда хозяин вернулся тонкого кишечника в брюшную полость полость, чтобы избежать тромбоза после закрытия брюшной полости.
- 0,1 мл cefuroxine (20mg/kg) остаются в полости живота, чтобы избежать инфекции, прежде чем закрыть живот.
- Чтобы быть уверенным не позволяйте фекалии текут в животе деятельности при выполнении небольших анастомоз кишечника, чтобы избежать инфекции после операции.
- Не повредите мезентериальных сосудов при сборе тонкой кишки, чтобы избежать небольшой некроз кишечника после операции.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Sutures | 10-0 and 11-0 | MONOSOF | ||
| Microscope | Unversal S3 | Carl Zeiss, Inc. |
References
- SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66 (3), 316-320 (2007).
- Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
- Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347 (9018), 1801-1803 (1996).
- Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62 (2), 216-220 (1999).
