La moelle épinière électrophysiologie II: fabrication des électrodes extracellulaires d'aspiration
Summary
Une démonstration de la fabrication et l'utilisation d'une électrode extracellulaire aspiration utilisés pour mesurer des enregistrements électrophysiologiques des cordons de rongeur néonatal épinière<em> In vitro</em
Abstract
Développement des circuits de neurones et la locomotion peut être étudiée à l'aide de la moelle épinière des rongeurs néonatale centrale générateur de pattern (CPG) de comportement. Nous démontrons une méthode pour fabriquer des électrodes d'aspiration qui sont utilisés pour examiner l'activité CPG, ou de la locomotion fictive, dans les cordons de rongeurs disséqué épinière. Les cordons de rongeurs épinière sont placés dans le liquide céphalorachidien artificiel et les racines ventrales sont entraînés dans l'électrode d'aspiration. L'électrode est construit en modifiant une électrode d'aspiration disponible commercialement. Un fil plus lourd argent est utilisé au lieu du fil standard donné par l'électrode disponibles commercialement. La pointe de verre sur l'électrode commercial est remplacé par un embout en plastique pour une durabilité accrue. Nous préparons la main électrodes dessinés et fabriqués à partir d'électrodes spécifiques tailles de tubes, ce qui permet la cohérence et la reproductibilité. Les données sont recueillies au moyen d'un amplificateur et un logiciel d'acquisition neurogram. Les enregistrements sont effectués sur une table de l'air intérieur d'une cage de Faraday pour éviter les interférences électriques et mécaniques, respectivement.
Protocol
Discussion
Développement du système nerveux peut être étudiée en utilisant des cordons rongeurs isolés épinière. En présence de neurotransmetteurs, la locomotion fictive peut être généré à partir de la moelle épinière dans la forme de motifs activité électrique 1,3. Ces bouffées rythmiques sont produites à 0,2 à 0,5 Hz et sont modelés en alternances gauche-droite et fléchisseurs-extenseurs. A différents stades de développement, la robustesse et les modèles de cette activité varie 1.…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Samuel L. Pfaff est un professeur dans les laboratoires de l'expression génique au Salk Institute for Biological Studies et un chercheur à l'Institut médical Howard Hughes. Ce travail a été soutenu par la Christopher Reeve et Dana Foundation. Joe Belcovson, Kent et Mike Sullivan Schnoeker de Ressources Multimédia à l'Institut Salk a fourni une aide à la photographie et l'édition.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” | |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | Clay Adams Brand Intramedic Becton Dickinson and Company | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) | |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | ||
| Adhesive | JB Weld | |||
| Adhesive: Silicone caulk | ||||
| Solder and soldering iron | ||||
| Bleach | ||||
| Xylene | ||||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | |||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| Magnetic Stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
| Miniboard (Headstage) | Grass Industries | F-15EB/B1 | ||
| Polyview Adaptor Unit | Grass Industries | PVA 8 | ||
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Industries | 15LT | ||
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | ||
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
References
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
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