手指棒运动诱导淋巴细胞凋亡的测定血液抽样方法
Summary
锻炼是能诱导免疫细胞凋亡。有各种测量的局限性，特别是有关的评估之前，隔离和治疗血液样本所需的时间。证明是一个快速运动诱导淋巴细胞凋亡的分析和微创手术。
Abstract
运动能诱导免疫细胞凋亡是一种生理刺激。种种限制，迄今为止，已确定这种现象的测量，尤其是有关的细胞死亡的评估之前，隔离和治疗血液样本所需的时间。正因为如此，它是难以确定是否增加免疫细胞凋亡的报道可以促进运动对系统的实际效果，或反映了必要的时间和处理，最终获得此测量。在这篇文章中，我们展示了运动诱导淋巴细胞凋亡分析一个快速和微创手术。与其他技术不同的是，全血立即被添加到抗体面板后，获得一个样品。潜伏期之后，红血细胞裂解样品准备进行分析。手指棒抽样程序的使用减少了所需的血液量，最大限度地减少科目的不适。
Protocol
1。手指沾采血休息时通常采取的收集全血为基准测量（通常是10-15分钟坐下休息），期间或之后立即行使回合，和整个运动后期间（一般1-3小时以下停止练习）。 使用通用的预防措施，首先消毒，用70％异丙醇的指尖。 下一步，穿刺网站使用自动柳叶刀或类似设备。虽然我们使用30号的柳叶刀为主题的舒适，较大的针头可利用。 擦去第一滴血，然后收集到毛细管或锂?…
Discussion
一种微创的样品收集过程和随后的分析表明运动诱导淋巴细胞凋亡的早期和晚期阶段的分析。它也可以明确地排除那些坏死，并没有凋亡的细胞，这是。此过程克服的弊端，从肘地区侵入静脉穿刺，在多个时间点之前相关的不适，期间和运动后即刻或安全行使回合期间导管。在调查中，这类程序通常需要放血，并非所有个人的专门培训。此外，受招聘和保留使用此过程预计将增强，从而增加了发?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
支持这项研究是由来自西肯塔基大学学院留学基金管理委员会的新教师津贴。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
References
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Tags
Finger-stick Blood SamplingExercise-induced Lymphocyte ApoptosisImmune CellsMeasurement LimitationsTime RequiredIsolation And Treatment Of Blood SampleAssessment Of Cell DeathEffect Of Exercise On The Immune SystemRapid And Minimally Invasive ProcedureAnalysis Of Exercise-induced Lymphocyte ApoptosisAntibody PanelIncubation PeriodRed Blood Cells LysisVolume Of Blood RequiredDiscomfort To Subjects
Cite This Article
Navalta, J., McFarlin, B., Simpson, R., Fedor, E., Kell, H., Lyons, S., Arnett, S., Schafer, M. Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis. J. Vis. Exp. (48), e2595, doi:10.3791/2595 (2011).