Finger-stick Metodologia di campionamento del sangue per la determinazione di esercizio apoptosi indotta da linfociti
Summary
L'esercizio fisico è in grado di indurre l'apoptosi nelle cellule del sistema immunitario. Ci sono limitazioni concernenti le misure varie, in particolare relativi alla quantità di tempo necessaria per isolare e trattare un campione di sangue prima della valutazione. È dimostrata una procedura rapida e mini-invasiva per l'analisi di esercizio apoptosi indotta da linfociti.
Abstract
L'esercizio fisico è uno stimolo fisiologico in grado di indurre l'apoptosi nelle cellule del sistema immunitario. Ad oggi, diverse limitazioni sono state identificate con la misura di questo fenomeno, in particolare relativi alla quantità di tempo necessaria per isolare e trattare un campione di sangue prima della valutazione della morte cellulare. A causa di questo, è difficile stabilire se un aumento segnalato in apoptosi delle cellule immunitarie possono essere contribuito l'effetto reale di esercizio del sistema, o un riflesso del tempo e di elaborazione necessaria per ottenere alla fine questa misura. In questo articolo si dimostra una procedura rapida e mini-invasiva per l'analisi di esercizio apoptosi indotta da linfociti. A differenza di altre tecniche, il sangue intero viene aggiunto a un pannello di anticorpi immediatamente dopo l'ottenimento di un campione. Dopo il periodo di incubazione, i globuli rossi vengono lisati ed i campioni sono pronti per essere analizzati. L'uso di un dito-stick procedura di campionamento riduce il volume di sangue richiesto, e riduce al minimo il disagio ai soggetti.
Protocol
Discussion
Un mini-invasiva procedura di raccolta dei campioni e successiva analisi è dimostrato per l'analisi delle fasi sia precoce e tardiva di esercizio apoptosi indotta da linfociti. E 'anche possibile escludere con chiarezza quelle cellule, che sono necrotico, e non apoptotica. Questa procedura risolve gli inconvenienti ed il disagio associato a venipuntura invasiva della regione antecubitale in momenti diversi, prima, durante e immediatamente dopo l'esercizio o attribuisce un catetere per tutta la durata della …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questa ricerca è stata sostenuta da una sovvenzione Facoltà Nuovo dal Consiglio di Facoltà borsa di studio alla Western Kentucky University.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
References
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