Punción en el dedo de sangre Metodología de muestreo para la determinación de la inducida por el ejercicio apoptosis de los linfocitos
Summary
El ejercicio es capaz de inducir la apoptosis en las células inmunes. Hay varias limitaciones de medición, especialmente en relación con la cantidad de tiempo necesario para aislar y tratar a una muestra de sangre antes de la evaluación. Demostrado es un procedimiento rápido y mínimamente invasivo para el análisis de la apoptosis inducida por el ejercicio de linfocitos.
Abstract
El ejercicio es un estímulo fisiológico capaz de inducir la apoptosis en las células inmunes. Hasta la fecha, diversas limitaciones han sido identificados con la medición de este fenómeno, especialmente en relación con la cantidad de tiempo necesario para aislar y tratar a una muestra de sangre antes de la evaluación de la muerte celular. Debido a esto, es difícil determinar si los aumentos reportados en la apoptosis de las células inmunitarias se puede contribuir al efecto real del ejercicio sobre el sistema, o son un reflejo de la época y el procesamiento necesario para obtener finalmente esta medida. En este artículo se demuestra un procedimiento rápido y mínimamente invasivo para el análisis del ejercicio de la apoptosis inducida por linfocitos. A diferencia de otras técnicas, la sangre entera se añade a un panel de anticuerpos inmediatamente después de obtener una muestra. Tras el período de incubación, los glóbulos rojos son lisadas y las muestras están listas para ser analizadas. El uso de un procedimiento de muestreo del dedo reduce el volumen de sangre requerido, y reduce al mínimo las molestias a los sujetos.
Protocol
Discussion
Un procedimiento de recogida de muestras de invasión mínima y su posterior análisis se demuestra en el análisis de las fases temprana y tardía inducida por el ejercicio de la apoptosis de los linfocitos. También es posible excluir con claridad las células, que son necrosis, apoptosis y no. Este procedimiento supera los inconvenientes y las molestias asociadas con la punción venosa invasiva de la región antecubital en múltiples momentos antes, durante e inmediatamente después del ejercicio, o asegurar un caté…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación fue financiada por una beca de la Facultad Nuevo en el Consejo de Becas de la Facultad en la Universidad de Western Kentucky.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
References
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