生物发光成像评估的免疫反应，植入心脏组织工程（东隧）
Summary
这个视频演示的使用<em>在体内</em>生物发光成像研究植入后大鼠的心脏组织工程（东隧）的免疫反应。
Abstract
心脏组织工程的各种技术已经在过去几十年，包括使用本机或生物人工肝的支架材料，如纤维蛋白或胶原蛋白凝胶心肌细胞塌陷1心肌细胞单层堆放的脚手架战略追求。这些概念的目的是恢复心脏功能受损（如心肌梗死后），或作为实验模型（如预测毒理学和药物筛选或疾病建模）。精确监测细胞工程心脏组织（东隧）植入后的生存现在已经成为可能使用在体内的生物发光成像技术（BLI） 2。在这里，我们描述的纤维蛋白为基础的东隧从无处不在表达萤火虫荧光素酶（罗萨/荧光素酶LEW TG; 3）的转基因鼠应变的一代。植入的到不同的大鼠株的大网膜，以评估东隧植入受体生物体的免疫反应。 BLI和酶的酶联免疫斑点技术（ELISPOT）确认的评估免疫反应的可用性，BLI产生的结果比较。
Protocol
1。东隧代和培养条件。 制造的纤维蛋白为基础的东隧，其他地方4所描述的。总之，生成纤维蛋白为基础的东隧植入的目的，主结构是包含从新生儿的ROSA /荧光素酶LEW转基因大鼠心脏，牛纤维蛋白原和基质胶细胞编制。琼脂糖压铸模具准备使用特氟隆垫片放置在6孔培养皿。琼脂糖凝固后，垫片被拆除，硅胶柱机架上培养皿放置到模具达到的职位。要生成东隧，mastermix?…
Discussion
对心肌修复东隧技术的临床实施之前，根本问题，如细 胞和基质成分或移植物存活的免疫原性植入后需要在活体生物发光成像实验模型进行评估。一个有用的新技术监测细胞的存活，移植后。我们成功地生成纤维蛋白为基础的东隧，含有荧光素酶（LUC）一个既定的协议4适应的心脏细胞。这些东隧植入受体鼠的大网膜。腹腔注射的特异底物（D -荧光素），产生的信号被检测到使…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
宋佳Schrepfer，莱纳德Conradi和Arne汉森收到由德意志研究联合会（DFG; SCHR992/3-1，SCHR992/4-1，二氧化碳858/1-1，医管局3423/3-1）的资金。这项工作是由来自欧盟托马斯Eschenhagen（EUGeneHeart和Angioscaff）的赠款支持。
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
Tags
Bioluminescence ImagingAssessmentImmune ResponsesImplantationScaffolding StrategiesNative Scaffold MaterialsBioartificial Scaffold MaterialsCardiac MyocytesHydrogelsFibrinCollagenMyocyte MonolayersRestoration Of Cardiac FunctionMyocardial InfarctionExperimental ModelsPredictive ToxicologySubstance ScreeningDisease ModellingCell Survival MonitoringIn-vivo Bioluminescence Imaging (BLI) TechniquesFibrin-based EHT GenerationTransgenic Rat StrainFirefly Luciferase ExpressionROSA/luciferase-LEW Tg StrainOmentum ImplantationImmune Responses AssessmentBLI Results Comparison With ELISPOT Technique
Cite This Article
Conradi, L., Pahrmann, C., Schmidt, S., Deuse, T., Hansen, A., Eder, A., Reichenspurner, H., Robbins, R. C., Eschenhagen, T., Schrepfer, S. Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT). J. Vis. Exp. (52), e2605, doi:10.3791/2605 (2011).