Imagerie par bioluminescence pour l'évaluation des réponses immunitaires après l'implantation du tissu cardiaque d'ingénierie (ISE)
Summary
Cette vidéo montre l'utilisation de<em> In vivo</emL'imagerie par bioluminescence> pour étudier les réponses immunitaires après l'implantation du tissu cardiaque d'ingénierie (ISE) chez le rat.
Abstract
Diverses techniques d'ingénierie tissulaire cardiaque ont été poursuivis dans les dernières décennies, y compris les stratégies d'échafaudage en utilisant soit natif ou bioartificiel matériaux d'échafaudage, piégeage des myocytes cardiaques dans les hydrogels tels que la fibrine ou de collagène et l'empilement des monocouches myocytes 1. Ces concepts visent à la restauration de la fonction cardiaque compromise (par exemple après un infarctus du myocarde) ou comme modèles expérimentaux (par exemple, la toxicologie prédictive et le dépistage de substances ou de modélisation de la maladie). Un suivi précis de la survie des cellules après l'implantation du tissu cardiaque d'ingénierie (ISE) est désormais possible en utilisant la bioluminescence in vivo d'imagerie (BLI) des techniques 2. Nous décrivons ici la génération de base de fibrine ISE partir d'une souche de rats transgéniques avec expression ubiquitaire de la luciférase de luciole (ROSA / luciférase-LEW Tg; 3). L'implantation est réalisée dans le grand omentum des différentes souches de rats afin d'évaluer la réponse immunitaire de l'organisme receveur après l'implantation d'ISE. Comparaison des résultats générés par BLI et l'enzyme liée Technique spot Immuno (ELISPOT) confirment l'utilité de BLI pour l'évaluation des réponses immunitaires.
Protocol
Discussion
Avant la mise en œuvre clinique de la technologie d'ISE pour la réparation cardiaque, des questions fondamentales telles que l'immunogénicité de deux composants cellulaires et de la matrice ou de la survie du greffon après l'implantation doivent être évalués dans des modèles expérimentaux. Imagerie par bioluminescence in vivo représente une nouvelle technique utile pour la survie des cellules de suivi après la transplantation . Nous avons réussi à généré à base de fibrine ISE conte…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi et Arne Hansen a reçu un financement de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). Le travail a également été soutenue par des subventions de l'Union européenne à Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart et Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
