エンジニア心臓組織の移植後免疫反応の評価（EHT）のための生物発光イメージング

Summary

このビデオはの使用方法を示しています<em> in vivoで</emラットにおけるエンジニアの心臓組織（EHT）の移植後の免疫応答を研究する>生物発光イメージング。

Abstract

心臓組織工学の様々な技法がネイティブまたはバイオ人工どちら足場材料、などのフィブリンやコラーゲンなどのヒドロゲルにおける心筋細胞の捕捉と筋細胞の単層¹のスタッキングを使用して足場の戦略などは過去数十年間で追求されています。これらの概念は、標的の心機能の回復（心筋梗塞後など）で、または実験的なモデル（例えば、予測毒性学と物質のスクリーニングや疾患のモデリング）として目指しています。人工心臓の組織の移植後の細胞生存率（EHT）の正確なモニタリングは、現在、生物発光イメージング（BLI）のテクニック² -生体内で使用可能となった。ここでは、ホタルルシフェラーゼのユビキタス発現^（、3 ROSA /ルシフェラーゼ- LEW Tg）を持つトランスジェニックラット系統からフィブリンベースのEHTの生成を説明します。注入はEHTの移植後の宿主の免疫応答を評価するために別のラット系統の大網に実行されます。 BLIと酵素結合免疫スポット法（ELISPOT）によって生成された結果の比較は、免疫応答の評価のためのBLIの有用性を確認する。

Protocol

1。 EHTの生成と培養条件フィブリンベースのEHTの製造は、他の4に記載のように行った。簡単に言うと、移植の目的のためにフィブリンベースEHTを生成するために、マスターミックスは、新生児のROSA /ルシフェラーゼ- LEWトランスジェニックラットの心臓、ウシフィブリノーゲン及びマトリゲルから単離した細胞を含む調製した。アガロース鋳型は6ウェル培養皿に?…

Discussion

心臓修復のためのEHT技術の臨床実施の前に、そのような移植後の細胞とマトリックスの両方のコンポーネントの免疫原性や移植片生存としての基本的な質問は、実験モデルで評価する必要がある。 生体内生物発光イメージングは、移植後のモニタリングの細胞の生存のための有用な新技術を表します。 。我々は正常に確立プロトコル⁴の適応により、ルシフェラーゼ正（リュ?…

Materials

• LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
• Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
• Matrigel (BD Bioscience 356235)
• DMEM (Biochrome F0415)
• Horse serum (Gibco 26050)
• Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
• Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
• Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
• d-Luciferin (Biosynth L-8220)
• Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)