Bioluminescence Imaging för bedömning av immunsvaret efter implantationen av Engineered hjärtvävnad (EHT)
Summary
Denna video demonstrerar användning av<em> In vivo</em> Mareld avbildning för att studera immunsvaret efter implantation av Engineered hjärtvävnad (EHT) hos råttor.
Abstract
Olika teknikerna för hjärtvävnad engineering ha skett i de senaste decennierna, inklusive byggnadsställningar strategier med antingen inbyggda eller bioartificial schavotten material, fastnar hjärt myocyter i hydrogel som fibrin eller kollagen och stapling av myocyte monolager 1. Dessa begrepp syftar till restaurering av nedsatt hjärtfunktion (t ex efter hjärtinfarkt) eller som experimentella modeller (t.ex. prediktiva toxikologi och substans screening eller sjukdom modellering). Noggrann kontroll av cellens överlevnad efter implantation av tekniska hjärtvävnad (EHT) har nu blivit möjligt med hjälp av in-vivo (BLI) mareld avbildningstekniker 2. Här beskriver vi den generation av fibrin-baserade EHT från en transgen råtta stam med allestädes närvarande uttryck i Firefly luciferas (Rosa / luciferas-LEW Tg, 3). Implantation sker i större omentum olika råtta stammar för att utvärdera immunsvaret hos mottagarorganismen följande EHT implantation. Jämförelse av resultaten som genereras av BLI och enzymet Linked Immuno Spot Technique (ELISPOT) bekräfta användbarheten av BLI för bedömning av immunsvaret.
Protocol
Discussion
Innan kliniska genomförandet av EHT teknik för hjärt-reparation, grundläggande frågor såsom immunogenicitet av både cellulära och matrix komponenter eller graft överlevnad efter implantation måste bedömas i experimentella modeller. In vivo mareld imaging utgör en användbar ny teknik för övervakning cellöverlevnad efter transplantation . Vi lyckades genererade fibrin-baserade EHT innehåller luciferas positiva (Luc +) hjärtceller i en anpassning av ett fastställt protokoll 4. Dessa E…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi och Arne Hansen fått finansiering från Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). Arbetet har också finansierats med bidrag från Europeiska unionen till Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart och Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
