ヒト神経幹細胞を継代
Summary
in vitroでのヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCs）を操作する能力は、治療目的のための細胞移植としてのユーティリティを調査し、人間の神経発生を探索することができます。このプロトコルは、ヒト幹細胞研究の増加再現性を期待して培養し、継代hNSPCsの方法を提示。
Abstract
in vitroでのヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCs）を操作する能力は、治療目的のための細胞移植としてのユーティリティを調査するだけでなく、人間の神経発生と病理学の多くの基本的なプロセスを探索する手段を提供します。このプロトコルは、この手法を標準化し、ヒト幹細胞研究の再現性を高めることを望んで培養し、継代hNSPCsの簡単な方法を提示。我々が使用するhNSPCsは国立ヒト神経幹細胞資源で死体生後脳の皮質から単離し、フィブロネクチン（パーマーら、2001;シュワルツら、2003。）でコーティングしたフラスコ上に付着培養物として増殖させた。 DMEMで我々の文化は私たちのhNSPCs：F12無血清培地はEGF、FGF、およびPDGFを補充し、通過それらの1時02分、約7日ごと。これらの条件を使用して、培養中の細胞の大半は、バイポーラの形態を維持し、未分化な神経幹細胞（そのようなネスチンとSox2など）のマーカーを発現する。
Protocol
Discussion
我々は、このプロトコルはhNSPCsの信頼性の高い文化を提供することを見出した。我々の細胞の一つの重要な要因は、彼らはかなり密培養物として維持されると細胞が疎であることがポイントに継代することができる必要があるということです。私たちの手では、疎な文化は非常にゆっくりと成長または完全に分割することを中止。文化は非常に密集しているときにこのような理由から、我々は、通常私たち?…
Acknowledgements
作者は感謝して子供の病院、その培養にhNSPCsと初期命令を提供するためのオレンジカウンティ研究所の国立ヒト神経幹細胞資源の博士フィリップH.シュワルツを認めます。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
| DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
| FGF, human basic recombinant | Reagent | Peprotech | 100-18B | |
| PDGF-AB | Reagent | Peprotech | 100-00AB | |
| EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm | ||
| Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
References
- Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).
- Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture. Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).
- Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. Cell culture. Progenitor cells from human brain after death. Nature. 411, 42-43 (2001).
- Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O’Dowd, D. K., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
