نحن هنا وصف الإجراء يسمح للتوسيم<em> الإدواردسيلة ictaluri في الموقع</em> في المقاطع النسيجية من قناة السلور<em> Ictalurus punctatus</em> باستخدام المناعية غير المباشرة مع الاجسام المضادة Ed9 باعتبارها الأضداد FitC الأولية ، وصفت بأنها الفلورسنت ثانوية. هذا يسمح للكشف عن هذه البكتيريا باستخدام المجهر الفلورسنت.
Abstract
بينما الإدواردسيلة ictaluri هو الممرض الرئيسي للقناة السلور Ictalurus punctatus ولقد تم اكتشاف ما يقرب من ثلاثة عقود مضت 1،2 ، حتى الآن ، أفضل من هذه المعرفة من الكتاب ، وقد وضعت توجد طريقة للسماح التصور في الموقع من البكتيريا الموجودة في المقاطع النسيجية.
في حين تم تحديد توطين الجرثومي في الجسم الحي في الدراسات السابقة باستخدام لوحة العد 3 ، 4 الراديومترية المسمى ، أو البكتيريا bioluminescent 5 ، إلا أن معظم هذه الدراسات أجريت على مستوى الجهاز الإجمالي ، مع استثناء واحد 6. هذا القيد هو مصدر قلق خاص لأن E. ictaluri لديه دورة العدوى 1،7 معقدة ، ولها مجموعة متنوعة من عوامل الفوعة 8،9. التفاعل المعقد بين هاء ictaluri مع مضيفه تشبه من نواح كثيرة لالسالمونيلا التيفية 10 ، وهو في نفس العائلة التصنيفية.
نحن هنا وصف تقنية تسمح للكشف عن بكتيريا غير المباشرة باستخدام الكيمياء النسيجية المناعية باستخدام أجسام مضادة وحيدة النسيلة Ed9 اينسورث التي وصفها آخرون 11.
باختصار ، يتم تطبيق حظر على المصل المقاطع النسيجية جزءا لا يتجزأ من البرافين لمنع غير محددة المتعهدة. ثم يتم تحضين المقاطع مع الضد الابتدائي : E. ictaluri ريتوكسيماب Ed9 محددة. يتم شطف الأضداد الزائدة بعيدا وتضاف FitC الأضداد الثانوي المسمى. بعد الشطف ، هي التي شنت المقاطع مع وسيلة معينة الفلورسنت المتزايدة.
هذا يسمح للكشف عن E. ictaluri في الموقع في الفروع النسيجي للأنسجة سمك السلور القناة.
Protocol
1. البكتيرية التحدي تنمو البكتيريا بين عشية وضحاها في 30 درجة مئوية في الدماغ تهتز مرق تسريب القلب. وقف توزيع المياه في خزانات الأسماك وإضافة مرق في تركيز 1 في 100 (10 مل لكل لتر ، على سبيل المث…
Discussion
هذا البروتوكول تفاصيل تقنية عن التصور في الموقع من ictaluri الممرض الإدواردسيلة سمك السلور في الفروع النسيجية. إلى حد علمنا ، وهذا هو أول بروتوكول من هذا القبيل وصفها.
الخطوة الأكثر أهمية ، في تجربتنا ، هو الشطف من الأض…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب ترغب في التعرف على المساعدة التقنية من بانيس ميشيل وكذلك الدكتور هانسون ، بيتري ، الأنقليس الدكتور تيموثي براون ولما قدموه من مساعدة البلدان النامية وتنفيذ المناعية. وقد تم تمويل هذا المشروع من قبل وزارة الزراعة الأميركية كريس المشروع # MISV – 0801310 وكلية جامعة ولاية ميسيسيبي للطب البيطري.
Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples. J. Vis. Exp. (51), e2687, doi:10.3791/2687 (2011).