Hier presenteren wij een protocol voor het uitvoeren van solide plaat op basis van dieetbeperking in<em> C. elegans</em> Met gedode bacteriën.
Abstract
Vermindering van de voedselinname, zonder ondervoeding of honger is bekend dat de levensduur te verhogen en het begin van verschillende leeftijd gerelateerde ziekten in een breed scala aan soorten, waaronder zoogdieren vertraging. Het veroorzaakt ook een afname in lichaamsgewicht en de vruchtbaarheid, maar ook lagere niveaus van plasma glucose, insuline en IGF-1 in deze dieren. Deze behandeling wordt vaak aangeduid als calorische restrictie (DR) of calorische restrictie (CR). De nematode Caenorhabditis elegans heeft zich ontpopt als een belangrijk modelorganisme voor het bestuderen van de biologie van veroudering. Zowel de milieu-en genetische manipulaties zijn gebruikt om het model DR en hebben aangetoond dat de levensduur te verlengen in C. elegans. Echter, veel van de gerapporteerde DR studies in C. elegans werden gedaan door het propageren van dieren in vloeibare media, terwijl de meeste van de genetische studies in de verouderende gebied werden gedaan op de standaard solide agar in petri-platen. Hier presenteren wij een DR-protocol met behulp van standaard solid NGM agar-based bord met gedode bacteriën.
Protocol
1. Tot vaststelling van een ijklijn voor de raming van bacteriën concentraties Dit hoofdstuk beschrijft een methode voor de schatting van de concentratie bacteriën voor een bepaalde bacteriën stam (bijv. OP50, HT115), die zal worden gebruikt als een voedselbron voor Dieetbeperking experimenten in C. elegans. Aparte kalibratiecurves moeten worden vastgesteld voor elke bacteriën stam gebruikt. Inoculeren een enkele kolonie van E. coli-bacteriën OP50 gepl…
Discussion
Dieetbeperking (DR) is bekend dat de levensduur te verhogen en het begin van verschillende leeftijd gerelateerde ziekten vertraging in een breed scala aan soorten, waaronder zoogdieren 5-7. Zowel de milieu-en genetische manipulaties zijn gebruikt om het model DR in C. elegans, waaronder het kweken van wormen in een semi-gedefinieerde vloeibaar medium 8,9, verdunning van de bacteriële voedselbron in vloeibaar medium 10-12, en het gebruik van het gedrag van mutanten die zich voed…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door een piloot prijs van de Nathan Shock Center (P30 AG13283) en een R01-subsidie (R01 AG028516) van het National Institute on Aging (NIA) naar A.-LH