Här presenterar vi ett protokoll för att utföra Plattor-baserade dietrestriktioner i<em> C. elegans</em> Med dödade bakterier.
Abstract
Minskning av födointag utan undernäring eller svält är kända för att öka livslängd och fördröja uppkomsten av olika åldersrelaterade sjukdomar i ett brett spektrum av arter, inklusive däggdjur. Det orsakar också en minskning i kroppsvikt och fertilitet, samt lägre nivåer av plasmaglukos, insulin och IGF-1 hos dessa djur. Denna behandling är ofta som dietrestriktioner (DR) eller kalorimängden (CR). Nematoden Caenorhabditis elegans har vuxit fram som en viktig organism i forskningen för att studera åldrandets biologi. Både miljömässiga och genetiska manipulationer har använts för att modellera DR och har visat sig förlänga livslängden i C. elegans. Men många av de rapporterade DR studier i C. elegans gjordes av förökningsmaterial djur i flytande medier, medan de flesta av de genetiska studier på den åldrande fältet gjordes på den standard fast agar i petri plattor. Här presenterar vi ett DR-protokoll med vanliga fasta NGM agar-baserad plåt med dödade bakterier.
Protocol
1. Upprättande av en kalibreringskurva för uppskattning av bakterier koncentrationer Detta avsnitt beskriver en metod för beräkning av bakterier koncentration för varje givet bakterietyp (t.ex. OP50, HT115) som kommer att användas som en näringskälla för dietrestriktioner experiment i C. elegans. Separata kalibreringskurvor bör fastställas för varje bakterier stam som använts. Inokulera en enda koloni av E. coli OP50 bakterier plockade från en…
Discussion
Dietrestriktioner (DR) är känd för att öka livslängd och fördröja uppkomsten av olika åldersrelaterade sjukdomar i ett brett spektrum av arter, inklusive däggdjur 5-7. Både miljömässiga och genetiska manipulationer har använts för att modellera DR i C. elegans, inklusive odling maskar i en semi-definierat flytande medium 8,9, utspädning av den bakteriella föda i flytande medium 10-12, och användning av beteenden mutanter som foder i en långsammare takt 13….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av en pilot utmärkelse från Nathan Shock Center (P30 AG13283) och en R01 bidrag (R01 AG028516) från National Institute on Aging (NIA) till A.-LH