सेल बायोलॉजी के लिए एक ढाल पैदा microfluidic युक्ति
Summary
हम ढाल पैदा microfluidic युक्ति है कि अच्छी तरह से परिभाषित microenvironment में स्थानिक और लौकिक gradients उत्पन्न कर सकते हैं microfabrication के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. इस दृष्टिकोण में, ढाल पैदा microfluidic युक्ति करने के लिए निर्देशित सेल प्रवास, embryogenesis, घाव भरने, और कैंसर मेटास्टेसिस का अध्ययन किया जा सकता.
Abstract
निर्माण और सेलुलर व्यवहार के अध्ययन के लिए एक ढाल पैदा microfluidic डिवाइस के आपरेशन में वर्णित है. एक microfluidic मंच एक समर्थकारी प्रायोगिक उपकरण है, क्योंकि यह ठीक द्रव प्रवाह में हेरफेर कर सकते हैं उच्च throughput प्रयोगों को सक्षम करने के लिए, और स्थिर घुलनशील एकाग्रता gradients उत्पन्न. पारंपरिक ढाल जनरेटर (dimethylsiloxane) पाली (PDMS) की तुलना में आधारित microfluidic उपकरणों प्रोफाइल के साथ अच्छी तरह से परिभाषित वृद्धि कारकों की स्थिर एकाग्रता gradients उत्पन्न कर सकते हैं. यहाँ, हम तीन अलग inlets के साथ सरल ढाल पैदा microfluidic उपकरणों को विकसित किया है. तीन microchannels एक microchannel में संयुक्त एकाग्रता gradients उत्पन्न. epidermal वृद्धि कारक (EGF) के लिए इसी तरह की एक आणविक वजन के साथ स्थिरता और वृद्धि कारक gradients के आकार fluorescein (FITC) isothyiocyanate-dextran द्वारा पुष्टि की गई. इस microfluidic युक्ति का प्रयोग, हमने दिखा दिया कि EGF की एकाग्रता gradients को उजागर fibroblasts उच्च सांद्रता की ओर चले गए. सेल और पलायन कोशिकाओं के प्रवास गतिशीलता के दिशात्मक उन्मुखीकरण मात्रात्मक विश्लेषण ट्रैकिंग सेल द्वारा मूल्यांकन किया गया. इस प्रकार, इस ढाल पैदा microfluidic युक्ति पलायन कोशिकाओं के व्यवहार का अध्ययन और विश्लेषण के लिए उपयोगी हो सकता है.
Protocol
Discussion
कक्ष एक microfluidic डिवाइस में उच्च सांद्रता ओर माइग्रेट EGF के स्थिर एकाग्रता gradients के लिए अवगत कराया. सेल प्रवास, chemotactic सूचकांक, पलायन कोशिकाओं की गतिशीलता के दिशात्मक उन्मुखीकरण सेल ट्रैकिंग विश्लेषण द्वारा जांच की ग?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran-FITC | Reagent | Sigma Aldrich | FD10S | Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated-dextran (10kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | human recombinant Epidermal growth factor | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 50 | ||
| Si wafer | silicone wafer, 4 inch | |||
| Petri dishes | ||||
| Polyethylene tubing | Becton Dickinon | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| Fibronectin | ||||
| NIH 3T3 | cell-line | fibroblast cells | ||
| Inverted microscope | Nikon | TE 2000 |
References
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