בדו"ח זה, אנחנו מדגימים מערכת לבודד התורם התרבות תאים מבלוטת החלב העכבר, ו orthotopically השתלת תאים אלה בעכברים הנמען לנתח סטרומה: אינטראקציות אפיתל במהלך התפתחות הגידול החלב.
ההשפעה של תאים סטרומה, כולל fibroblasts על התקדמות הגידול החלב תועד היטב באמצעות מודלים העכבר, בעיקר באמצעות השתלה של תאים סטרומה ותאי אפיתל של בלוטת החלב של עכברים. מודלים השתלת נוכחי לעתים קרובות כרוכות בשימוש בעכברים immunocompromised בשל רקע גנטי שונה של תאים סטרומה ותאי אפיתל. מטריצות תאיים משמשים לעתים קרובות כדי להטביע את שני סוגי תאים שונים עבור תאים תאים אינטראקציות עקבי, אבל כרוכות בשימוש Matrigel או קולגן עכברוש הזנב, אשר מצעים immunogenic. חוסר בתאי T פונקציונלי מעכברים החיסון מונע הערכה מדויקת של תאים סטרומה על התקדמות הגידול החלב in vivo, עם השלכות חשובות על פיתוח התרופה ויעילותה. יתר על כן, העכברים immunocompromised הם יקרים, קשה להתרבות דורשים תנאים טיפול מיוחד. כדי להתגבר על מכשולים אלה, פיתחנו גישה orthotopically השתלת תאים סטרומה ותאי אפיתל לעכברים מרקע גנטי זהה לגרום להיווצרות גידול עקבי. מערכת זו כוללת איסוף נורמלי, קרצינומה fibroblasts הקשורים, PyVmT בתאי סרטן השד ו קולגן מעכברים התורם C57BL/6J. התאים המוטבעים אז קולגן המושתלים בתוך בלוטות החלב של הנקבה מפשעתי עכברים C57BL/6J. השתלה של תאים PyVmT לבד בצורה מוחשית השתלת גידולים ימים 30-40 פוסט. ניתוח Endpoint ב 60 ימים מציין כי שיתוף השתלת עם fibroblasts משפר את צמיחת הגידול החלב לעומת התאים המושתלים PyVmT לבד. בעוד תאים מטריצה מעכברים C57BL/6J שימשו במחקרים אלה, בידוד של תאים מטריקס גישה השתלת ניתן להחיל כלפי עכברים מרקע גנטי שונה הוכחת צדדיות. לסיכום, מערכת זו יכולה לשמש כדי לחקור אינטראקציות מולקולריות בין תאים סטרומה ותאי אפיתל, וגם מתגבר על מגבלות קריטי מודלים העכבר immunocompromised.
התרומה התפקודית של fibroblasts בהתקדמות הגידול הוכח באמצעות מודלים השתלה, שבו קרצינומה fibroblasts הקשורים שיתוף המושתלים עם תאים שפירים אפיתל תוצאות החלב בתוך הגידול גדל הפולשנות 5. גישות השתלת קונבנציונלי יש מעורבים את השימוש של עכברים SCID או בעירום לשתף השתלת תאים סטר?…
The authors have nothing to disclose.
פרויקט זה מומן באמצעות מענק במספר NIH / NCI R00 CA127357 ואת אוניברסיטת קנזס Cancer Center הקרן.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
DMEM | VWR | 10000113873 | |
Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
DAPI | Invitrogen | D21490 | |
Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
# 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
betadine | fisher | NC9386574 | |
Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
Wound staple | Fisher | 12031-07 |