옐로 피버 모스키토에서 Hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 Aedes aegypti</em
Summary
A는 설명 모기 hemocytes를 수집하고 얼룩 아직 정확한 방법을 단순화. 우리의 방법은 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 재관류의 단순 결합. 이 방법은 연구가 필요한 hemocytes의 유형에 대한 지식과 풍부한을 용이하게합니다.
Abstract
모기는 황열병 바이러스, 말라리아 기생충 및 filarial 웜과 같은 질병을 유발 병원균의 번호를 벡터입니다. 실험실은 병원균 1, 2 내화물 아르 유전자 변형 모기를 생성하는 희망에서 질병 벡터 수종에 본래 면역 시스템의 백신 병원체 구성 요소를 조사하고 있습니다. 모기의 타고난 면역 시스템은 방어 3 몇 가지 라인으로 구성되어 있습니다. 상피 – 줄지어 모기 midgut 사에 의해 부과된 장벽을 탈출하기 위해 관리 병원균은 hemolymph를 입력 순환 hemocytes, 캡슐 중요한 세포 구성 요소와 삼켜의 병원균 5, 6을 발생합니다. 연구팀은 모기의 조혈 조직에 대한 증거를 발견하지 않은 현재의 증거는 hemocytes의 숫자가 성인 출현에 고정하고 숫자가 실제로 모기 세 7로 거부할 수있는 제안합니다. 제대로 수집하고 의료 중요한 곤충의 hemocytes를 식별하는 능력은 세포 면역의 연구에 필수적인 단계입니다. 그러나, 모기의 작은 크기와 hemolymph의 제한된 볼륨 면역 세포를 수집하는 도전을 제기.
모기 hemocytes를 수집하기 위해 두 설립 방법은 상처 코 8 hemolymph의 추방, 그리고 호수가 머리와 흉부 (즉, 자궁 경부)와 perfused hemolymph가 수집되는 사이 막의 necklike 영역으로 주입되는 볼륨 변위 (재관류)를 포함 복부 9, 10의 말초 지역의 찢어진 오프닝에서. 이러한 기술은, 그러나, hemocytes의 낮은 복구 및 각각 11 지방 신체 세포에 의해 오염 가능성에 의해 제한됩니다. 오염 저울 및 내부 조직 11 레벨을 감소하면서 최근에는 방법이 항응고제 버퍼의 사용에 의해 immunocytes 높은 주입 / 복구 개선 복구이라고도합니다. 그 방법이 기본 문화 hemocytes를 수집 및 유지 관리의 개선 방법에 대한 수 있지만, 그것은 주사와 하류 목표가 진단에 대한 hemocytes를 수집, 수정하고 얼룩이있다면 필요하지 않습니다 수집 단계의 숫자를 알아볼 수 있습니다. 여기, 우리는 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 생리 식염수 대신에 항응고제 버퍼를 사용하여 재관류의 단순 결합 모기 hemolymph를 수집하는 우리의 방법을 보여줍니다.
Protocol
Discussion
hemocyte 수집 방법은 이전에 게시 방법에서 수정 한 적은 수의 단계를 Aedes 모기에서 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 수있다 여기에서 설명한. 우리의 특별한 관심 Aedes 모기에 hemocyte 인구 특성화에 자리잡고 있지만, 우리는 초기 실험이 적절한 사출 볼륨을 결정하기 위해 실시 후이 기법은 다른 모기 그룹에 적용할 수 믿습니다. 우리 프로토콜은 생리 식염수 대신 항응고제 버퍼를 사용?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 모기가 양육을 위해 존 프라이와 벤 피터슨 감사하고 싶습니다. 우리는 또한 hemocyte micrographs와 관련하여 도움이 크리스틴 데이비스와 게리 Radice 감사드립니다. 이 연구는 리치몬드 예술 & AA Qayum와 A. Telang에 교수 부여하는 과학 여름 교제 대학에 의해 투자되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Schneider’s Medium | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Fetal bovine serum | Sigma-Aldrich | F0643 | |
| Hema3 stain kit | Fisher | 123-869 | |
| Glass needles (borosilicate with filament) |
Sutter Instrument | BF100-78-10 | 1.0mm O.D. and 0.78mm I.D. |
| Needle puller | Sutter Instruments | Model P-87 | |
| MicroInjector | Tritech Research | MINJ-PD | |
| Needle holder | Tritech Research | MINJ-4 |
References
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