Summary

Trichuris muris Enfeksiyon: Gut Tip 2 Bağışıklık ve İnflamasyon Bir Model

Published: May 24, 2011
doi:

Summary

Trichuris muris enfeksiyon dayanıklı farelerde koruyucu bir Th2 yanıtı oluşturmak ve duyarlı fareler patolojik bir Th1 yanıtı Th2 dokunulmazlık bağırsak modelidir.

Abstract

Trichuris muris farelerin doğal bir patojen ve enfekte insanlar ve hayvancılık 1 Trichuris türleri biyolojik ve antijenik olarak benzer . Enfektif yumurta ağızdan sonda ile distal ince bağırsakta ambar tarafından verilen, çizgi çekum ve proksimal kolon ve olgunlaşma üzerine kript solucanlar ortamı içine 1 yumurta serbest intestinal epitel hücrelerinde (IECS) işgal. Bu model faktörleri incelemek için güçlü bir araç olduğunu kontrol CD4 + T helper (Th) hücre aktivasyonu yanı sıra bağırsak epitel değişiklikleri. C57BL / 6 ve BALB / c gibi dayanıklı kendilenmiş suşları, ortaya çıkan immün yanıt, polarize Th2 sitokinlerin (IL-4, IL-5 ve IL-13) ve ilişkili Th1 sitokinlerin iken (IL solucanlar sürülmesi ile karakterizedir -12, IL-18, IFN-γ) kronik enfeksiyonlar, genetik olarak yatkın AKR / J fareler 2-6 teşvik . Th2 sitokinleri hızlı IECS ciro, goblet hücre farklılaşması, işe alma ve epitelyal permeabilite ve düz kas kasılması, solucan sınırdışı 7-15 suçlanmıştır hangi değişiklikler dahil olmak üzere bağırsak mikroçevresinin fizyolojik değişiklikler teşvik eder. Burada detay Trichuris muris yumurta sonraki deneylerde kullanılan propaganda için bir protokol. Ayrıca enfeksiyon sonrası analizi için önerileri ile örnek bir deneysel hasat sağlar. Genel olarak, bu protokol, gastrointestinal sistem gibi IECS immün efektör fonksiyonları Th eğilimine ilişkin soruları yanıtlamak için kullanılabilecek bir Trichuris muris fare enfeksiyon modeli gerçekleştirmek için temel araçları araştırmacılar sağlayacaktır .

Protocol

1. Trichuris muris yumurta Çoğaltım (Ya da genetik olarak yatkın fareler Trichuris muris yumurta yeni toplu üretmek için, 20-30 bağışık yetmezliği olan farelere enfekte () örneğin NOD.Cg-Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) veya 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 – /) örn. ağızdan sonda ile yaklaşık 300 Trichuris muris yumurta ile 6-8 hafta eski AKR / J). CO 2 boğulma 32-35 gün sonra fareler kurban. </l…

Discussion

Bu protokol, araştırmacı tarafından gerekli olarak modifiye edilebilir bir standart yüksek doz akut Trichuris muris enfeksiyon. Örneğin, fare kurban edilebilir ve dokuların farklı günlerde hasat. Farelerin tam solucan yükü başarıyla kurduk belirlemek için hangi noktada tüm fareler yaklaşık 200 solucanlar bir yük taşımak, 14. günde kurban edilebilir. Fareler de 32 gün için tespit edilen solucan olgunluğa erişmiş olacak ve ömrünün süresi için ev sahibi ile kalacaktı enfekte olabil…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (MSH-95.368, MOP-89.773 ve MOP-106.623 – CZ) ve Kanada Yenilik Vakfı tarafından desteklenmiştir. SCM, Gastroenteroloji doktora sonrası burs CIHR / Kanada Derneği alıcı. CZ CIHR Yeni Araştırmacı.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Animal Feeding Needles (18 x 1½”) Popper 7912  
Smooth curved Forceps Roboz RS-5047  
DMEM Gibco 11965  
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) Jackson Laboratories 005557 These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work.
RNAlater Qiagen 76104  
2 ml tubes Axygen MCT-200-C  
15 ml tubes Falcon 352096  
6 well plates Falcon 353046  
Paraformaldehyde Electron Microscopy Science 15710  
α-RELMβ antibody PeproTech Inc 0694270Rb  

References

  1. Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
  2. Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
  3. Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
  4. Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
  5. Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
  6. Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
  7. Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
  8. Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
  9. Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
  10. Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
  11. Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
  12. Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
  13. Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
  14. Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
  15. Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
  16. Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
  17. Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).

Play Video

Cite This Article
Antignano, F., Mullaly, S. C., Burrows, K., Zaph, C. Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut. J. Vis. Exp. (51), e2774, doi:10.3791/2774 (2011).

View Video