In Vitro Пробирной бактериальной адгезии на эпителиальных клетках млекопитающих
Summary
Этот протокол является простым бактериальной адгезии анализ состоящей в подсчете числа бактериальных колониеобразующих единиц, которые будут соблюдаться на культуре клеток. Анализа является надежной, независимой от адгезина изучены, и многочисленные вариации используются в большинстве лабораторий, работающих на бактериальную патогенез.
Abstract
Чтобы вызвать инфекции, бактерии должны колонизировать хозяина. Бактериальные возбудители выражения различных молекул или структур, способных содействовать привязанности к клеткам хозяина 1. Эти адгезины опираться на взаимодействие с клеткой-хозяином поверхностных рецепторов или растворимые белки, выступая в качестве моста между бактериями и хозяином. Адгезия является важнейшим первым шагом до вторжения и / или секрецию токсины, таким образом, он является ключевым событием для изучения в бактериальных патогенез. Кроме того, придерживался бактерии часто вызывают изысканно тонкой настройки клеточных реакций, исследования, которые родили области 2 'сотовой микробиологии. Надежные анализы для бактериальной адгезии на клетках хозяина и их вторжения, следовательно, играют ключевую роль в патогенезе бактериального исследования и уже давно используется во многих лабораториях пионером 3,4. Эти анализы в настоящее время практикуется большинством лабораторий, работающих на бактериальную патогенез.
Здесь мы описываем стандартном анализе соблюдения иллюстрирующие вклад конкретного адгезина. Мы используем штаммом кишечной палочки 2787 5, человека штамма патогенного выражения Автовоз Adhesin Участие в диффузных сцепления (AIDA). В качестве контроля мы используем мутантного штамма отсутствует ген Аида, 2787Δ Аида (Ф. и М. Бертиом Mourez, не опубликовано), а также коммерческие лаборатории штамма Е. палочка, C600 (Новая Англия Биолабс). Бактерии остаются придерживаться клетки обычно используются НЕр-2 человека эпителиальной клеточной линии. Этот анализ был менее подробно описана до 6.
Protocol
Discussion
Этот протокол описывает стандартные бактериального анализа соблюдения, которые могут быть модифицированы для изучения инвазии (например, с использованием гентамицина защиты анализа 3). Подсчет колониеобразующих единиц позволяет количественного определения, по сравнению с под?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа в лаборатории авторов поддерживается грантами от естествознания и техники Научно-исследовательский совет Канады, Канада института исследований в области здравоохранения и Канаде исследований кафедр программы. JL поддерживает общение с Groupe d'Этюд де Белки Membranaires (GEPROM) через финансирование из Fonds по исследованиям ан Sante Квебека.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
References
- Kline, K. A. Bacterial adhesins in host-microbe interactions. Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).
- Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. Cellular microbiology emerging. Science. 271, 315-315 (1996).
- Elsinghorst, E. A. Measurement of invasion by gentamicin resistance. Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).
- Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).
- Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).
- Benz, I., Schmidt, M. A. Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli. Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).
- Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I). J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).
- Jacques, M., Paradis, S. E. Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae. FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).
- Auger, E. Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells. Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).
- Jacques, M. Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence. Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).
- Nataro, J. P., Kaper, J. B. Diarrheagenic Escherichia coli. Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).
- Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors. Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).
