बैक्टीरियल आसंजन के स्तनधारी उपकला कोशिकाओं पर इन विट्रो परख
Summary
यह एक सरल बैक्टीरियल आसंजन बैक्टीरियल कॉलोनी कि संवर्धित कोशिकाओं पर पालन कर रहे हैं इकाइयों के गठन की संख्या की गिनती में शामिल परख प्रोटोकॉल है. परख मजबूत है, adhesin के स्वतंत्र अध्ययन, और कई बदलाव ज्यादातर प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है बैक्टीरियल रोगजनन पर काम कर रहे है.
Abstract
संक्रमण पैदा करने के लिए, बैक्टीरिया अपने मेजबान उपनिवेश स्थापित करना चाहिए. बैक्टीरियल रोगज़नक़ों विभिन्न अणुओं या लगाव को बढ़ावा देने के लिए मेजबान 1 कोशिकाओं में सक्षम संरचनाओं व्यक्त करते हैं . इन adhesins मेजबान कोशिका की सतह रिसेप्टर्स या घुलनशील प्रोटीन बैक्टीरिया और मेजबान के बीच एक पुल के रूप में अभिनय के साथ बातचीत पर भरोसा करते हैं. आसंजन एक महत्वपूर्ण पहला आक्रमण और / या विषाक्त पदार्थों के स्राव के लिए पहले कदम है, इस प्रकार यह एक महत्वपूर्ण घटना है बैक्टीरियल रोगजनन में अध्ययन किया जा है. इसके अलावा, पालन बैक्टीरिया अक्सर exquisitely ठीक tuned सेलुलर प्रतिक्रियाओं, अध्ययन जिसमें से सेलुलर सूक्ष्म जीव विज्ञान '2 के क्षेत्र को जन्म दिया है प्रेरित . बैक्टीरियल आसंजन और मेजबान कोशिकाओं पर उनके आक्रमण के लिए मजबूत assays इसलिए बैक्टीरियल रोगजनन अध्ययनों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और लंबे समय से कई अग्रणी 3,4 प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल किया गया है. ये assays अब सबसे बैक्टीरियल रोगजनन पर काम प्रयोगशालाओं द्वारा अभ्यास कर रहे हैं.
यहाँ, हम एक मानक पालन एक विशिष्ट adhesin के योगदान illustrating परख का वर्णन करता है. हम Escherichia कोलाई तनाव 5 +२,७८७, एक मानव रोगजनक autotransporter विसरित पालन (AIDA) में शामिल Adhesin व्यक्त तनाव का उपयोग करें. किसी नियंत्रण के रूप में, हम एक उत्परिवर्ती तनाव का उपयोग AIDA जीन, 2787Δ Aida (एफ Berthiaume और एम. Mourez, अप्रकाशित) और ई. के एक वाणिज्यिक प्रयोगशाला तनाव की कमी कोलाई, C600 (न्यू इंग्लैंड Biolabs). बैक्टीरिया आमतौर पर इस्तेमाल किया Hep दो मानव उपकला कोशिका लाइन से कोशिकाओं का पालन करने के लिए छोड़ दिया जाता है. इस परख कम बड़े पैमाने पर 6 से पहले वर्णित किया गया है.
Protocol
Discussion
यह एक मानक है कि आक्रमण अध्ययन (gentamicin संरक्षण परख 3 का उपयोग उदाहरण के लिए) करने के लिए संशोधित किया जा सकता जीवाणु पालन परख प्रोटोकॉल का वर्णन करता है. कॉलोनी बनाने इकाइयों की गिनती मात्रा का ठहराव एक ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों की प्रयोगशालाओं में कार्य प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद, कनाडा के कनाडा के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान, और कनाडा अनुसंधान अध्यक्षों कार्यक्रम से अनुदान द्वारा समर्थित है. जीएल Fonds डे Recherche SANTE डु क्यूबेक एन से धन के माध्यम से ग्रुप डी तसवीर का ख़ाका डेस Protéines Membranaires (GEPROM) से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित है.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
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