난소와 Oviducts의 3 차원 조직 문화 알긴산의 Hydrogels
Summary
그들의 입체적인 맥락에서 정상 세포의 문화 세포 변형 및 tumorigenesis에 필요한 초기 이벤트를 연구하는 다른 방법을 나타냅니다. 이 방법은 난소암 형성 초기에 이벤트를 연구 정상 난소와 oviductal 세포를 성장하는 데 사용됩니다.
Abstract
난소암은 여성 암 사망의 다섯 번째 주요 원인이며, 미국 1 63% 사망률이 있습니다. 난소 암에 대한 원산지 세포 유형은 문제가 여전히하거나, 난소 표면 상피 (오세) 또는 나팔관의 fimbriae 2,3의 말초 상피 수 있습니다. 체외의 기본 문화로 정상 세포 Culturing 과학자함으로써 definitively 원산지의 세포 유형을 결정, 뚜렷한 상피에서 난소암으로 이어질 수도 있습니다 특정 변경 내용을 모델로 사용됩니다. 이것은이 질병을 대상으로보다 정확한 생체, 조직 특정 유전자의 변화와 동물 모델, 그리고 더 나은 예방 전략의 개발을하실 수 있습니다.
알지네이트요의 hydrogels에서 정상 세포를 유지하는 것은 자신의 입체적인 맥락에서 세포의 체외 배양에 단기을 촉진하고 플라스미드 DNA, siRNA, 작은 분자의 도입을 수 있습니다. 하나의 동물에서 실험의 수를 증가 하나 장기 생성하실 수 있습니다 메스, 여러 문화를 사용하는 전략 상처에서 파생됩니다 조각 culturing 기관에 의해. 이것은 난소암의 형성과 관련된 오세의 확산에 선도적인 배란의 모델 측면을 인하. 이러한 플라스틱 표면에 잘 성장하지 않는 오세으로 셀 형식은이 방법을 사용하여 교양과 정상 세포의 프로세스 또는 암 형성 4에서 가장 오래된 행사로 조사를 용이하게하실 수 있습니다.
알긴산의 hydrogels는 조직 5 다양한 종류의 성장을 지원하기 위해 사용할 수 있습니다. 알긴산은 손상 조직 6,7하지 않는 부드러운 겔화 작업의 결과, β – D – mannuronic의 산성과 칼슘 이온과 가교 수있는 α – L – guluronic 수 소산의 단위를 반복 구성된 선형 다당류이다. 같은 Matrigel 같은 다른 세 차원 세포 배양 매트릭스와 마찬가지로 알지네이트요 티슈에 대한 기계적 지원을 제공하지만, 단백질은 알지네이트요 매트릭스와 반응하지 않습니다, 따라서 세포가 5 신호 시작하지 않는 합성 세포외 기질로 알지네이트요 기능. 알지네이트요의 히드로겔 표준 세포 배양 매체 수레와 체외에서 조직 성장의 아키텍처를 지원합니다.
방법을 준비, 분리, 최대 2 주가에 대한 문화의 유지 수 알지네이트요의 hydrogels로 난소 및 oviductal 오르간 작품의 포함을 위해 제공됩니다. 장기 문화 단백질과 RNA 샘플의 분석을 위해 세포의 효소 출시도 설명합니다. 마지막으로, 기본 세포 유형의 성장은 생쥐에서 유전자 불멸화없이 가능하며 한방과 유전자 변형 마우스를 사용하는 수사관을 수 있습니다.
Protocol
Discussion
알지네이트요의 hydrogels를 이용한 3 차원 오르간 문화 시스템의 개발은 생물의 다양한에서 여러 가지 조직 유형을 분석하는 다양한 방법을 나타냅니다. 그것이 세포가 11 성장할 수있는 발판을 제공과 같은 3D 문화의 사용은 조직 공학 및 재생 의학 분야로 확장될 수 있습니다. 현재, 저희 연구실은 인간의 난소와 나팔관 조직을 사용하여 초기 연구를 겪고 있지만, 인간이 아닌 인간 영장류 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 난소암 연구 기금에 의해 지원되었다 [부여 LT/UIC/01.2011] 임상 및 Translational 과학, UIC 암 센터, 보건 부여 C06RR15482 국립 연구소에 대한 UIC 센터.
동물 실험은 UIC의 동물 케어 및 사용위원회의 승인을 동물 관리 프로토콜에 따라 AAALAC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다. 이 프로젝트에 대해 동물 시카고 일리노이 대학에서 생물 자원 연구소 (BRL)에 장벽 장소에 있습니다. BRL 적어도 두 번 매일 동물을 모니터링하고 동물 보호에 대한 조언을 제공하는 완전히 수의과 직원이 있습니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Leibovitz L-15 medium | Gibco | 11415 | |
| αMEM medium | Gibco | 12000-022 | |
| Sodium alginate | Novamatrix | ||
| Sodium cacodylate | Sigma Aldrich | C0250 | |
| Polypropylene mesh fiber | McMaster Carr | 45″ wide roll; 0.0041″ opening | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668 | |
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15070-063 | |
| Alginate lyase | Sigma Aldrich | A1603 | |
| A1603 | Sigma Aldrich | C9697 | From Clostridium histolyticum |
| Bovine serum albumin | MP Biomedicals | 103700 | |
| Fetal bovine serum | Gibco | Gibco | |
| ITS solution | Roche | 11074547001 | Insulin/transferrin/sodium selenite |
| Cytokeratin 8 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | TROMA-1 | Use at 1:200 |
| DAPI | Vector Labs | H1200 | |
| Bromodeoxyuridine | Sigma | B50002-1G | Final concentration 10 μM |
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