원자 힘 현미경에 의해 영상에 대한 세균 고정
1Biological and Nanoscale Systems Group, Biosciences Division,Oak Ridge National Laboratory, 2Department of Biochemistry and Cellular and Molecular Biology,University of Tennessee , 3Department of Surgery,Eastern Virginia Medical School, 4Center for Nanophase Materials Sciences Division,Oak Ridge National Laboratory
Summary
라이브 그람 음성 및 그람 양성 세균은 젤라틴 코팅 운모에 고정화 및 원자 힘 현미경 (AFM)을 사용하여 액체에 몇 군데 있습니다.
Abstract
AFM은 이미징 도구를 기계적으로 프로브 표면 고해상도 (NM 규모)입니다. 그것은 화학 샘플을 치료하기 위해 필요없이, 액체 환경에서, 이미지 세포 biomolecules 수있는 능력이 있습니다. 이러한 목표를 달성하기 위해 예제는 충분히 스캔 AFM의 캔틸레버 팁 의해 끼쳤다 힘에 의해 제거를 방지하기 위해 장착 표면을 준수해야합니다. 많은 경우에, 성공적인 영상이 장착 표면에 시료의 고정에 따라 달라집니다. 최적 고정은 신진 대사 프로세스와 기능 특성이 손상되지 않습니다 같은 샘플을 법으로서해야합니다. 돼지의 (돼지) 젤라틴과 코팅 갓 죽습 운모 표면에 의해 부정 청구 박테리아가 표면에 고정화 수 있으며 AFM에 의해 액체에 몇 군데. 젤라틴 – 코팅 운모에 세균 세포의 고정은 부정 청구 세균과 긍정적인 혐의 젤라틴 사이의 정전 기적 상호 작용에 의한 가능성이 높습니다. 여러 가지 요인은 박테리아가 일시 중지되는 액체, 세균 긴장과 세균이 몇 군데있는 매체의 젤라틴 코팅 운모, 표면 특성에 박테리아의 배양 시간의 화학 성분을 포함하여 세균의 고정과 방해할 수 있습니다. 전반적으로, 젤라틴 코팅 운모의 사용은 이미지의 미생물 세포에 대해 일반적으로 적용할 수 발견됩니다.
Protocol
1. 미카 준비 : AFM 현미경 (약 22 × 30mm)에 맞게 필요한 크기로 가위로 운모를 (전자 현미경 과학) 잘라. 클리브가 양쪽에있는 미카가 일반적으로 바깥쪽 레이어를 제거하는 테이프를 사용하는 것은 부드럽고 깨지지 레이어가 남을 때까지. 2. 젤라틴 용액의 준비 : 실험실 병에 증류수 100 ML을 추가합니다. 물이 끓기 시작할 때까지 전자 레인지…
Discussion
다양한 요인에 의해 미생물의 AFM 장착 휴대폰 및 이미징에 영향을 미칠 수 있습니다. 코팅에 사용되는 젤라틴은 운모가 중요합니다. 상업 젤라틴은 물고기, 소, 돼지를 포함한 척추 동물의 숫자에서 격리됩니다. 기원과 처리 방법은 모두 고정 세균에 대한 젤라틴의 적합성을 결정합니다. 다양한 소스 및 젤라틴의 종류 immobilizing 박테리아에서 효과에 대한 평가되었다 [1]. 두 가지 가장 효과적인 gel…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 생물학과 환경 연구의 사무실, 에너지 미국학과로와 버지니아 연방 보건 연구위원회에서 부여 기금을 후원합니다. 오크 리지 국립 연구소는 계약 번호 DE – AC05 – 00OR22725에 따라 에너지의 미국학과에 대한 UT – 바텔, LLC에 의해 관리됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalogue number |
| Gelatin | Sigma, St. Louis, MO | G6144, G2625 or G2500 |
| PicoPlus Atomic Force Microscope | Agilent Technologies, Tempe, AZ | |
| AFM cantilevers | Veeco, Santa Barbara, CA | MLCT-AUHW |
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Cite This Article
Allison, D. P., Sullivan, C. J., Mortensen, N. P., Retterer, S. T., Doktycz, M. Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy. J. Vis. Exp. (54), e2880, doi:10.3791/2880 (2011).