Summary
O fator limitante no uso do adulto<em> Drosophila</em> Olho para estudar neurodegeneração e biologia celular é a imagem difícil de processos intracelulares. Descrevemos a dissecação de omatídeos única para gerar uma boa-fé de cultura de células neuronais primários, que podem ser sujeitos a tratamento medicamentoso e avançados de imagem.
Abstract
A mosca da fruta Drosophila melanogaster fez contribuições inestimáveis para pesquisa em neurociência e tem sido amplamente utilizado como modelo para doenças neurodegenerativas por causa de sua genética poderosa 1. O olho da mosca em particular, tem sido o órgão de escolha para a pesquisa neurodegeneração, sendo a parte mais acessível e de vida dispensáveis do sistema nervoso Drosophila. No entanto, a ressalva importante de olhos intactos é a dificuldade, por causa da intensa autofluorescência do pigmento, em eventos intracelulares de imagem, como a autofagia dinâmica 2, que são fundamentais para a compreensão da neurodegeneração.
Temos utilizado recentemente a dissecção ea cultura de omatídeos única 3 que tem sido essencial para a nossa compreensão das disfunções autofágica em um modelo de voar (DRPLA) 3 de Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofia, 4.
Temos agora um relatório de descrição abrangente dessa técnica (Fig. 1), adaptado de estudos eletrofisiológicos 5, que é provável expandir dramaticamente a possibilidade de voar por modelos neurodegeneração. Este método pode ser adaptado a imagem ao vivo de eventos subcelulares e para monitorar a administração da droga eficaz para células fotorreceptoras (Fig. 2). Se usado em combinação com técnicas de mosaico 6-8, as respostas das células geneticamente diferentes podem ser testadas em paralelo (Fig. 2).
Protocol
Discussion
A dissecção omatídeo única apresentada aqui permite a coleta de informações mais profundas sobre os processos biológicos celulares, como neurodegeneração, quando modelada no olho Drosophila. Os neurônios fotorreceptores são mais facilmente acessível do que outros neurônios e eles citoplasma é particularmente grande, e, portanto, adequado para estudar a dinâmica da vesícula, nas células mesma usada eficientemente em muitos modelos para quantificar neurodegeneração in vivo. O aspecto c…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a Bernard Charroux para as discussões. Este trabalho foi financiado pela Escola KCL Biomédica.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
References
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