Necropsia de diagnóstico e coleta de tecido e amostra selecionada em ratos e camundongos
Summary
Este artigo descreve os procedimentos para a realização de um exame post-mortem básicas de um mouse ou rato, ea coleta de órgãos básica, bem como mais tipos de amostra desafiador para avaliação histológica, microbiológica e PCR.
Abstract
Existem vários tipos de amostras que podem ser coletadas de um animal sacrificado, a fim de ajudar a diagnosticar ou descobrir agentes infecciosos em uma colônia animal. Cobrança adequada dos tecidos para processamento histológico mais podem impactar a qualidade dos resultados de testes. Este artigo descreve a conduta de um exame básico bruta incluindo a identificação de coração, fígado, pulmões, rins e baço, bem como a forma de recolher esses órgãos. Além disso quatro dos mais difíceis técnicas de tecido / da coleta da amostra são demonstradas. Coleta de perfusão pulmonar e pode ser particularmente difícil como o tecido tem de ser devidamente inflado com um fixador, para que dentro do tecido para fixar corretamente e para permitir a avaliação histológica completa. Este artigo demonstra o passo a passo a técnica para remover o pulmão e inflá-lo com o fixador, a fim de obter uma fixação ideal do tecido no prazo de 24 horas. Coleta de cérebro pode ser igualmente desafiador como o tecido é macio e facilmente danificada. Este artigo demonstra o passo a passo técnica para expor e remover o cérebro do crânio com danos mínimos ao tecido. Linfonodo mesentérico é uma boa amostra do tipo em que muitos comuns para detectar agentes infecciosos como vírus entéricos persistir por mais tempo no linfonodo do que são eliminados nas fezes. Este artigo demonstra o procedimento passo a passo para localizar e remover o assepticamente linfonodos mesentéricos. Finalmente, a identificação de agentes infecciosos do trato respiratório podem ser realizadas por cultura bacteriana ou testes PCR de nasal e / ou brônquica fluidos aspirados tomadas no momento da necropsia. Este procedimento descreve a obtenção e preparação da amostra de aspirado respiratório para a cultura bacteriana e testes de PCR.
Protocol
Discussion
Coleta de dados no final de um estudo pode exigir um exame post-mortem dos animais. Descrevem bem o que é visto e lembre-se de examinar todos os tecidos. Estes procedimentos são projetados principalmente para otimizar a necropsia e coleta de amostras para vigilância de doenças infecciosas, mas a maioria é facilmente adaptado para as investigações de incidentes focada suspeita de doença ou surtos em que talvez apenas um subconjunto dos procedimentos seriam empregadas. Muitos dos procedimentos também são relevan…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalog number | Comments |
|---|---|---|---|
| Cutting board | Thermo Electron Corp Cat #36114 | Cat #36114 | |
| Small scissors | ROBOZ | RS-5910, G204 | 23mm blades, 3.5″ length, straight |
| Medium scissors | ROBOZ | RS-6808, G207 | 5″ |
| Large scissors | ROBOZ | RS-6826, G65″ | 6.25″ |
| Forceps-Curved | ROBOZ | RS-8254 (M1/21004) | 4.5″, serrated, slight curve |
| Forceps-Microdissecting | ROBOZ | RS-5238 | Hudson-(EWALD) |
| Forceps-Tissue Forceps | ROBOZ | RS–8160 | Rat tooth |
| Flame sterilizer | Oxford Labware Products | Bacti-Cinerator #5889-001007 | |
| Scalpel | Cancer Diagnostics, Inc. | Finger Scalpels #60, Cat#FS0060 | |
| Pipettes | VWR | Pasteur Pipet 5 3/4″, Cat#14672-400 | |
| Autoclave bags | Propper Manufacturing Company | Sterilizer Bag Paper Pouches Cat#021002(3100923)E09110 | For Pasteur pipettes |
| Pipette bulb | VWR | Cat#56310-240 | |
| Eppendorf tubes | Sarstedt | SafeSeal microtube 2mL, Ref#72.695 | |
| Eppendorf tubes | Argos | 5mL microtube Cat#T20765-C | |
| Syringe | BD (Beckton Dickenson) | 1ml-309602 3 ml-300910 5ml-309603 10mL Cat#309604 20mL Cat#309661 | |
| Needles | BD | 26G-309625 18G-305195 | |
| Neutral buffered formalin | VWR | 20L 10% NBF, Cat#16004-128 | |
| Saline | ThermoScientific | Buffered Blood Bank Saline, Cat#23-309-178 | |
| Trypticase soy broth | Becton Dickenson | TSB: Dehydrated, Cat#211825 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | HA Buffer, Cat#P3813-10PAK | |
| Formalin cups | VWR | 4oz Cat#36318-852 8oz Cat#36318-860 16oz Cat#36318-858 | |
| Large formalin cups | OakRidge Products | 32oz container Cat#0432-1100 | |
| Extra large formalin cup | VWR | HDPE Multipurpose 160oz container Cat#89038-282 | |
| Suture material | Henry Schein | Braided silk surgical suture, Ref#100-5000, M766750 | For mouse lung inflation |
| Twine | Staples | Cat#QUA-46173 | For rat lung inflation |
References
- AVMA. . AVMA Guidelines on Euthanasia. , (2007).
- Feldman, D. B., Seely, J. C. . Necropsy Guide: Rodents and the rabbit. , (1988).
- King, J. M., Dodd, D. C., Roth, L. . The Necropsy Book. , (2006).
- Kittel, B. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).
- Komarek, V., Fox, J. G. Chapter 1. The Mouse in Biomedical Research. , 1-22 (2007).
- Morawietz, G. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–Part 3. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).
- Popesko, P., Raijtová, V., Horák, J. . Colour Atlas of Anatomy of Small Laboratory Animals. 2, 91-106 (2002).
- Ruehl-Fehlert, C. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
