Summary

機能心臓の免疫細胞の単離

Published: December 05, 2011
doi:

Summary

心臓から機能的な免疫細胞を単離するためのこの方法では、これらの細胞の反応性の低下、その結果、不要な免疫細胞の活性化を引き起こすコラゲナーゼ消化、の従来の方法に代わる方法が用意されています。分離の手法は、酵素消化に関連する問題を回避することによって機能的な心臓の免疫細胞が得られます。

Abstract

。心臓の免疫細胞は肥満細胞、T細胞およびマクロファージを含む1月5日 、これらの免疫細胞は、彼らは多くの心臓疾患の病理学的リモデリングにおいて果たす役割に関心を集めている、店舗やサイトカインを含む生物学的活性のメディエーターの様々を解放し、このようなトリプターゼとしてプロテアーゼ。6-8これらのメディエーターは、マトリックスメタロプロテアーゼの活性化や変調心臓線維芽細胞"機能により、コラーゲンの蓄積を引き起こすことにより細胞外マトリックスの代謝に重要なプレーヤーであることが示されている。9-11しかし、心臓の免疫細胞を単離するために利用できる技術は持っている彼らは心筋組織を消化する細菌性コラゲナーゼを使用するため、問題となって。この手法は、免疫細胞の活性化とそのための機能が失われます。例えば、心臓の肥満細胞が脱顆粒を引き起こす化合物を大幅に軽減応答になる。12だから、我々はtを可能にする技術を開発彼の心疾患におけるこれらの細胞の役割の理解につながる機能性心臓免疫細胞の分離。13、14

このメソッドは、解剖学的なラットの剣状突起、腋窩および鎌状靱帯の位置、および心臓の心膜に精通している必要があります。これらのランドマークは、プロシージャの成功を増加させると心臓の免疫細胞のより高い利回りを確保することが重要です。これらの孤立した心臓の免疫細胞は、機能性、表現型、成熟度、および他の心臓の細胞との共培養実験その相互作用の理解を得るための特性評価に使用することができます。

Protocol

1。ハンクスバランス塩溶液の調製(HBSS) オートクレーブ1Lのガラスビーカー、1000mLのはメスシリンダー、そしてバーをかき混ぜる。 再蒸留水で900mLのマークにオートクレーブ1リットルのガラス製ビーカーにHBSS粉のソリューションを再構築。 ヘペスのNa +塩3.4 gをとりHBSS溶液を混和し、濃塩酸や水酸化ナトリウムのいずれかを使用して7.35から7.41の間の値にpHを調整する?…

Discussion

心臓の免疫細胞を単離するこのメソッドは通常、伝統的な酵素消化の単離技術の間に発生する不要な活性化することなく、機能、表現型、および成熟度の分析を可能にします。この手法で得られた細胞の平均合計数は、ラットの心臓あたり約40万であり、そしてこれらの細胞の差の染色とフローサイトメトリー分析は、T -リンパ球の混合集団(〜70%)、マクロファージ(〜12%)と肥満細胞?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この作品は、UNCF -メルク大学院科学研究論文フェローシップ(JLM)、国立心臓、肺、血液研究所の助成金RO1 – HL – 62228(JSJ)とRO1 – HL – 073990(JSJ)によってサポートされていました。

Materials

Name of Reagent and Equipment Company Catalogue Number Comments
Hanks’ Balanced Salt Sigma H4891 One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt
Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt
Solution as a part of the procedure.
Antibiotic- Antimyotic Gibco 15240-062  
HEPES Sigma H3784  
Bovine Serum Albumin Sigma A3912  
250 mL Nalogene Filter Bottle Thermoscientific 157-0020  
12 N HCL Fisher Scientific CAS 7647-01-0 For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water.
10 N NaOH Fisher Scientific SC267 For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water.
Double Distilled Water      

Table of Specific Equipment:

Name of Reagent and Equipment Company Catalogue Number Comments
3-O Suture Silk Braided Ethicon Products SA64H  
Small Animal Ventilator CWE Incorporated SAR-830 Set breathing rate to 40.5 breaths per min.
Bevel 18 gauge needle BD Biosciences 305199 Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube.
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter Baxter 2N111 Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4.
10 cc syringe Fisher Scientific 14-823-16B  
15 mL Falcon Tubes BD Biosciences 352097  
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge Fisher Scientific 75-004-377 Remember to pre-cool and keep at 4°C.
Hyclone Thermoscientific S300030.02  
Hemocytometer Hausser Scientific HS-LB-1483  

References

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Cite This Article
McLarty, J. L., Meléndez, G. C., Spencer, W. J., Levick, S. P., Brower, G. L., Janicki, J. S. Isolation of Functional Cardiac Immune Cells. J. Vis. Exp. (58), e3020, doi:10.3791/3020 (2011).

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