마음에서 기능적 면역 세포를 분리를위한이 방법은 이러한 세포의 감소 반응의 결과로, 원치 않는 면역 세포 활성화의 원인이 collagenase의 소화의 종래의 방법에 대한 대안을 제공합니다. 격리 우리의 방법은 효소 소화와 관련된 문제를 피함으로써 기능 심장병 면역 세포를 산출.
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이 논문에서
요약
초록
심장 면역 세포들은 많은 심장 질환의 병리 리모델링에서 재생 역할에 대한 관심을 쫒아오고 있습니다 마스트 세포, T - 세포 및 macrophages 포함 1-5 이들 면역 세포;. 저장하고 크린 시토킨 및 포함하여 생물학적으로 활성 중재자 다양한 릴리스 같은 tryptase 같은 프로 테아제. 6-8이 중재자는 매트릭스 metalloproteinases를 활성화하거나 modulating 심장 섬유아 세포 '기능에 의해 콜라겐 축적을 유발하여 세포외 기질 대사의 주요 선수로 표시되었습니다. 9-11하지만, 심장 면역 세포를 분리에 사용할 기술이있다 그들은 심근 조직을 소화 박테리아 collagenase을 사용하기 때문에 문제가되었습니다. 이 기술은 면역 세포의 활성화 및 따라서 기능의 손실을 초래합니다. 예를 들어, 심장 마스트 세포가 degranulation의 원인이 화합물에 훨씬 적은 반응이된다. 12 따라서, 우리는 t을 허용하는 기술을 개발그는 심장 질환에서 이러한 세포의 역할에 대한 이해로 이어질 것입니다 기능적 심장 면역 세포의 분리. 13, 14
이 방법은 심장의 해부 쥐의 검상 돌기 프로세스, 겨드랑이와 낫 모양의 제품 인대의 위치, 그리고 심낭과 친숙이 필요합니다. 이러한 랜드마크 프로 시저의 성공을 증가하고 심장 면역 세포의 높은 수율을 보장하기 위해 중요합니다. 이러한 격리 심장 면역 세포는 그 기능 표현형, 만기, 그리고 다른 심장 세포와 공동 배양 실험들은 상호 작용의 더 나은 이해를 얻을 수의 특성에 사용될 수 있습니다.
프로토콜
1. 행크스 '잔액 소금 솔루션의 준비 (HBSS)
- 압력솥 1 L의 유리 비커는 1000 ML은 실린더 졸업하고, 바 저어.
- 두 번 증류수로 900 ML 표시에 autoclaved 1 L의 유리 비커에 HBSS 분말 솔루션 Reconstitute.
- Hepes 나 + 소금 3.4 g와 HBSS 용액을 혼합하고 집중 HCL 또는 NaOH을 사용 7.35-7.41 사이의 값을 산도를 조정합니다.
- 원하는 산도가 획득하고 안정적인 유지되면 알부민이 완전히 해소되기 전까지 실온에서 솔루션에 알부민 소 혈청 5g을 추가합니다.
- 전체 볼륨 1000 ML 표시에까지 솔루션, antimyotic, 항생제를 두 번 증류수 10 ML을 추가합니다.
- 철저하게 솔루션을 저어.
- HBSS 용액을 필터하고 나중에 사용하기 위해 50 ML 팔콘 튜브에 그것을 구분합니다. 추가 튜브는 냉동과 나중에 사용할 수 있습니다.
2. 동물 PreparatioN - Tracheal 튜브의 삽입
- 필요한 악기 및 tracheal 튜브 (즉, 포셉, 가위, tracheal 튜브 3-0 블랙 꼰의 봉합, 작은 동물 환풍기 등) 삽입....
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토론
심장 면역 세포를 분리 이러한 방법은 일반적으로 전통적인 효소 소화 절연 기술 중에 발생하는 원치 않는 작동하지 않고 자신의 기능, 표현형, 그리고 성숙의 분석을 수 있습니다. 이 기술을 얻은 세포의 평균 총수는 쥐 심장 당 400,000 주위되며, 이러한 세포의 차동 얼룩 및 유동세포계측법 분석 T - lymphocytes의 혼합 인구 (~ 70 %), macrophages (~ 12 %)와 마스트 세포와를 나타냅니다 이 기법의 사용. (~ 12 %). 13, 따라서 14, 심장 면역 세포 인구의 자세한 분리 정제 방법이 필요합니다. 절연 면역 세포 기능 연구, 유동세포계측법, immunofluroescence 및 공동 문화 실험을 포함하여 여러 어플 리케이션에 사용할 수 있습니다. 더 정화 및 실험을 통해 이러한 고립된 전지 심장 리모델링의 과정에서 면역 체계의 역할을 이해하는 유용한 도구를 제공합니다.
동물 안.......
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공개 사항
우리는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
이 작품은 UNCF - 머크 대학원 과학 연구 논문 장학생 (JLM), 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 부여 RO1 - HL - 62228 (JSJ)와 RO1 - HL - 073990 (JSJ)에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 및 장비의 명칭 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| 행크스 '균형 소금 | 시그마 | H4891 | 한 병은 행크스 '대차 소금 1 패하게 솔루션. Reconstitute 행크스 '밸런스 소금 절차의 일환으로 솔루션입니다. |
| 항생제 - Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
| HEPES | 시그마 | H3784 | |
| 소 혈청 알부민 | 시그마 | A3912 | |
| 250 ML의 Nalogene 필터 병 | Thermoscientific | 157-0020 | |
| 12 N HCL | 피셔 과학 | CAS 7647-01-0 | 6 N 들어, deionized에 HCL의 동일한 볼륨을 추가물. |
| 10 N NaOH | 피셔 과학 | SC267 | 5 N 들어, 탈이온수에 NaOH 동등한 볼륨을 추가합니다. |
| 두 번 증류수 |
특정 장비의 테이블 :
| 시약 및 장비의 명칭 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 3 - O 봉합사 실크 꼰 | Ethicon 제품 | SA64H | |
| 작은 동물 환풍기 | CWE 법인 | SAR - 830 | 분 당 40.5 심호흡으로 호흡 속도를 설정합니다. |
| 베벨 18 게이지 바늘 | BD Biosciences | 305,199 | tracheal 튜브로 사용하기 위해 원래 길이의 1 / 2 4분의 3로 바늘을 낸다. |
| 24 게이지 박스터 빠른 선배 카테터의 테플론 팁 (바늘이 제거된) | 벡스터 | 2N111 | 1 / 2 4분의 3로 테플론 팁 길이를 줄입니다. |
| 10 CC 주사기 | 피셔 과학 | 14-823 - 16B | |
| 15 ML 팔콘 튜브 | BD Biosciences | 352,097 | |
| Sorvall RT6000B 냉장 원심 분리기 | 피셔 과학 | 75-004-377 | 사전 냉각 기억하고 4 유지 ° C. |
| Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
| Hemocytometer | Hausser 과학 | HS - LB - 1483 |
참고문헌
- Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).
- Brower, G. L., Janicki, J. S.
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재인쇄 및 허가
