1. System Configuration F-7000 Fluorescence spektrofotometer utstyrt med høy følsomhet utvidet rekkevidde photomultiplier R-928F detektor. F-7000 Tilbehør: Rhodamine B, lys diffuser, rødt filter og sub-standard lyskilde ble brukt til å generere de spektrale korreksjonsfaktorer for instrumentet. Quantum Yield måling tilbehør, som inkluderer: 60 mm Integrering sfære, aluminiumoksid hvite fliser, Spectralon hvit standard, Powder celler (2EA), aluminiumoksid pulver og kvanteutbytte programvare. Rapport Generator programmet og den aktuelle malen skal brukes til beregning av Farge koordinater. 2. System Setup Slå på Hitachi F-7000 fluorescens spektrofotometer og la xenon lampe å varme opp til en time. Begynn å bruke standard sample rom (kyvetteholderen) installert i instrumentet. 3. ACQuisition av Integrering Sphere Korreksjonsfaktorene Ved måling av Integrering Sphere korrigeringsfaktorer, velger programvaren automatisk måling testparametrene oppført i Tabell 1. Analytiske VILKÅR Måling Bølgelengde skanning Skannemodus Synkron Data-modus Fluorescens EM WL 200 nm EX Start-WL 200 nm EX End WL 900 nm Skannehastighet 240 nm / min Forsinkelse 5,0 s EX Slit 5,0 nm EM Splitt 20 nm PMT Spenning 250 V Korrigert spektra PÅ Response Auto Tabell 1. 3.1. Oppkjøp av diffuser data Plasser diffusor i standard prøven og lukk prøven kupé. Klikk på vinduet kvanteutbytte korreksjonsfaktor Måling og deretter på Diffuser måling. Angi filnavnet: "IS_factor_F70_diffuser" for diffusoren data og klikk OK (Video 1). Etter måling, vil filen bli lagret i "riktig" mappe FL Solutions. Figur 1 er et eksempel på diffusoren Måledata. 3.2. Oppkjøp av korreksjonsfaktor for no prøve (referanse) <ol> Fjern standard sample kupé fra instrumentet, butikken diffuser, deretter installere integrere sfære. Fyll pulver celle med aluminiumoksid pulver opp til en høyde på minst 25 mm for å sikre at pulveret fullt ut dekker porten for å integrere sfære. Trykk på bunnen av cellen nøye for å komprimere pulveret. Plasser aluminiumoksid hvite fliser i referanse-porten (P2) av å integrere sfære (den mot utslipp monokromator) og pulveret celle med aluminiumoksid i utvalget port (P1) av Integrering sfære (den mot eksitasjon monokromator ). Klikk på kvanteutbytte korreksjonsfaktor Måling vinduet, deretter på Integrering Sphere Measurement (uten sample) (Video 2). Programvaren vil minne deg på å sette prøvene. Skriv inn navnet "IS uten sample" og klikk OK. Etter måling, vil filen bli lagret i mappen "korrigering t "av FL Solutions. Figur 2 er et eksempel på Integrering Sphere uten eksempeldata måledata. 3.3. Oppkjøp av korreksjonsfaktor i nærvær av en prøve: Fjern celle med aluminiumoksid pulver og erstatte den med Spectralon hvite standard. (The Spectralon standarden bør være vendt eksitasjon monokromator (P1)). Klikk på kvanteutbytte korreksjonsfaktor Måling vinduet og deretter på Integrering Sphere Måling (med prøve). Programvaren vil minne deg på å sette standarden Reflektans Materiale for måling. Skriv inn navnet: "IS med sample" for Integrating Sphere med prøven data filen og klikk OK (bilde 3). Etter måling, vil filen bli lagret i "riktig" mappe FL Solutions. Figur 3 er et eksempel på Integrering Sphere med eksempeldata måledata. "> MERK: I tilfelle du trenger å bruke avkuttede filtrene til å blokkere andre for spredning lys på utslipp side som forstyrrer fluorescens topp, må du måle en grunnlinje med diffuser bare og også diffuser og riktig filter disse. datafiler vil bli brukt av programvaren ved beregning kvanteutbytte. I praksis anbefaler vi å måle alle de avkuttede filtrene som en del av den første satt opp av systemet. 4. Eksempel Måling (Sodium salicylate Powder) Kvanteutbytte måling innebærer overtakelse av en emisjon spektrum for både no-sample (referanse) og i nærvær av en prøve. Velg analytiske måleparametere som følger: Klikk på "Method"-knappen, og i kategorien Generelt velger bølgelengde skanning som måling modus og angi riktig informasjon om operatøren og tilbehør(Video 4). Klikk på "Instrument"-fanen og angi måleparametre for instrumentet som vist i Tabell 2 (Video 5). Analytiske VILKÅR Måling Bølgelengde skanning Skannemodus Utslipp Data-modus Fluorescens EX WL 350 nm EM Begynn WL 330 nm EM Avslutt WL 600 nm Skannehastighet 1200 nm / min Forsinkelse 0 sek EX Slit 5,0 nm EM Splitt 5,0 nm PMT Spenning 350 V Korrigert spektra PÅ Response Auto Korrigert spektra PÅ Tabell 2. Ingen flere innstillinger er nødvendig på dette tidspunktet siden Monitor, Processing and Report tabulatorinnstillinger kan gjøres etter at dataene er blitt målt. Vi bare kommer til å vurdere dem, og klikk på OK-knappen for å sette de utvalgte måleparametre i instrumentet (Video 6). Som et alternativ, kan innstillinger valgt lagres for fremtidig bruk. Vi vil fortsette nå måle aluminiumoksid referansestandard med direkte eksitasjon. Plasser pulver celle med Al2O3 pulver i utvalget måling port (P1) (foran eksitasjon stråle). Klikk på "Sample"-knappenog skriv prøven navn: "P1_Baseline_Al2O3", klikk deretter på boksen ved siden av "Auto fil". Velg mappen og filnavnet for data: "P1_Baseline_Al2O3", deretter "Lagre" og "OK" (bilde 7). Klikk på "Mål"-knappen for å måle Al2O3 prøven. (Video 8), etter at databehandlingen åpnes, klikk på "Auto Scale Axis"-knappen justere skalaen, for å visualisere spredning topp med direkte eksitasjon (figur 4). Nå vil vi fortsette å måle utvalget av Sodium salicylate bruke direkte eksitasjon. Klikk på "Sample"-ikonet og skrive "P1_Sodium salicylate" for prøven og filnavn, og klikk på OK-knappen (Video 9). Plasser Sodium salicylate prøven i pulveret celle og i P1-porten på å integrere sfære (porten mot magnetisering lysstråle) og klikk på "Mål"-knappen. (Video 10) Når dataene prosessening åpnes, klikk på "Auto Scale Axis"-knappen for å justere skalaen og visualisere spredning og fluorescens topper. På dette tidspunktet vil vi gjenta målinger for aluminiumoksid og Sodium salicylate med prøvene plassert i P2-porten på å integrere sfære, for å lese dem med indirekte eksitasjon. Klikk først på "Sample"-knappen og skriv prøven og filnavnet: "P2_Baseline_Al2O3" for dem begge (Video 11). Flytt aluminiumoksid hvite flis fra P2 til P1 for å integrere sfære og plassere en celle fylt med aluminiumoksid pulver i P2. Klikk på "måle" knappen for å lese prøven (Video 12). For å fullføre prøven målingen vi trenger for å måle natrium salicylate prøven ved hjelp av indirekte bestråling. Først skal vi skrive prøven og filnavnene som i forrige trinn. Navnet vil være P2_Sodium salicylate (Video 13). Plasser natrium salicylate prøven i P2-porten på å integrere sfære og klikk Measure knappen (Video 14). 5. Kvanteutbytte Beregning Først vil vi fortsette å laste integrerende sphere korreksjonsfaktorer. Klikk på kvanteutbytte Beregning knappen for å åpne kvanteutbytte beregningsprogram (Video 15). Klikk på kvanteutbytte korreksjonsfaktor Innstilling knappen (Video 16). Klikk på Integrering Sphere Correction fanen og klikk i boksen foran "Integrering sfære korreksjon", klikk deretter på Filter Correction fanen og kontroller at "Filter korreksjon" boksen ikke er valgt, klikk igjen på Integrering Sphere Correction kategorien (Video 17 ). Klikk på Load knappen i Diffuse Measurement Data-seksjonen, velg fil "IS_factor_F70 no sample" ( <strong> Video 18). Velg "IS_factor_F70_diffuser"-filen og klikk deretter på lasten knappen (Video 19). Klikk på Load knappen for Integrering sphere måledata (uten sample) seksjonen (Video 20). Velg "IS_factor_F70 no sample" filen og klikk deretter på lasten knappen (Video 21). Klikk på Load knappen for Integrering sphere måledata (med mal) seksjonen (Video 22). Velg "IS_factor_F70 med sample" filen og deretter på lasten knappen (Video 23). Normalisert bølgelengde kan stå på 600nm eller justeres mot bølgelengde verdien der integrere sfæren korreksjon er lik en. For å gjøre dette, pass på at boksen foran "Display kvanteutbytte beregning vindu" er valgt og klikk på OK knappen for "Quantum Yield Factor Setting" window, som vil stenge dette vinduet (Video 24). Klikk nå på "Integrering Sphere Correction" kategorien i "Quantum Yield Beregning" vinduet og juster markøren inntil Integrering sfæren korreksjon lesing er "1", noe som gjør oppmerksom på bølgelengde (Video 25). Klikk på "Quantum Yield korreksjonsfaktor Setting" og hvis det kreves endring normalisert bølgelengde til lesingen innhentet i forrige trinn, og klikk på OK-knappen (Video 26). Det neste trinnet er å laste Baseline og prøve datafiler Klikk på "Quantum Yield Beregning"-kategorien (Video 27). Load "Data uten sample" (fil P1_Baseline_ Al2O3) for direkte bestråling ved å klikke på lasten knappen og laste "Data med sample" (fil P1_Sodium salicylate) for direkte bestråling (Video 28). <li> Neste vi vil fortsette å velge "scattering" og "fluorescens" regioner (Video 29). Nå vil vi beregne kvanteutbytte for direkte bestråling av prøven. Klikk på "Beregning"-knappen og lese resultatene (Video 30). Vi trenger disse opplysningene for den endelige beregningen av kvanteutbytte for prøven tatt i betraktning indirekte eksitasjon. Klikk på Tekst-fil og lagre dataene under filnavnet "QY direkte bestråling" (Video 31). Ved hjelp av data filer P2_Baseline_Al2O3 og P2_Sodium salicylate, vil vi beregne kvanteutbytte for indirekte eksitasjon (Video 32) Nå skal vi lagre disse dataene for den endelige kvanteutbytte beregning. Klikk på Tekst-fil og lagre data tekstfilen under navnet "QY Indirekte Bestråling" (Video 33) Nå skal vi åpne to tekstfiler i Excel med de kvanteutbytte data for retningt og indirekte eksitasjon. Til slutt vil vi beregne Quantum Yield for prøven inkludert effekten av indirekte Eksitasjon, ved hjelp av følgende formel: Φ = Φd-(1-Ad) ΦI Hvor: Φ er den korrigerte kvanteutbytte hensyntatt indirekte eksitasjon Φd er den interne kvanteutbytte bruke Direct eksitasjon. (Intern kvanteutbytte = Mengde fluorescens / Mengde absorbert eksitasjon lys.) Ad er absorptance for direkte magnetisering. (Dette er forholdet mellom mengden av eksitasjon bjelke absorberes av prøven). (Absorbance = (AREX – CsEx) / AREX, hvor AREX er mengden av eksitasjon lys og CsEx er mengden av reflektert lys) ΦI er den interne kvanteutbytte hjelp Indirect Eksitasjon Φ = 0,536 – (1 til 0.848) 0.420 Beregnet Φ = 0,47216 6. Beregning av Farge Vi vil bruke den valgfrie programvaren Report Generator sammen med en mal utarbeidet for beregning av chromaticity. Åpne datafilen P1_Sodium salicylate (Video 34). Klikk på "Property"-knappen, deretter "Rapport fanen". I "Output" velg "Bruk print generator ark" fra rullegardinmenyen. I "Print eks" velg mal "FL70Std01_Color-chart.xls" og klikk "Åpne" knappen. Det er ikke nødvendig å velge bølgelengdeområdet og intervall, da dette gjøres automatisk ved Report Generator (Video 35). Det neste trinnet er å lage rapporten. Klikk på "Rapport"-fanen og makro for å opprette rapporten vil bli utført og lagret i "Rapporter"-mappen i Excel-format under prøven navn (Video 36). < / Li> På dette tidspunktet kan vi åpne rapporten for å se fargen data (Video 37). 7. Secrets til suksess Bruk ferske prøver. Vær oppmerksom på at materiale fra forskjellige produsenter kunne gi ulike resultater. Trykk bunnen av pulveret cellen å komprimere prøven og presentere en ensartet overflate for måling. Beskytt prøver fra lys. De svekkes med lyseksponering. Prøv å bruke en raskere skanning hastighet for å minimere prøve eksponering for lys. 8. Representative Resultater 8.1. Natrium salicylate er kjent for å ha en kvanteutbytte av 0,4 til 0,5 Figur 1. Klikk her for å se større figur . iles/ftp_upload/3066/3066fig2.jpg "alt =" Figur 1 "/> Figur 2. Klikk her for å se større figur . Figur 3. Klikk her for å se større figur .