多种生长因子和蛋白质相互作用,从而诱导细胞在发展过程中不同的细胞命运。在这里,我们展示了一个在OVO准备使用,以解决发展中的不同的蛋白质之间可能的相互作用,由珠E2.5鸡胚。
神经管表示在特定的时空模式,在开发过程中的多种蛋白质。这些蛋白质已被证明是对细胞命运的决心,细胞迁移,并形成神经回路至关重要。神经元的诱导和图案涉及骨形态发生蛋白(BMP),刺猬(SHH),成纤维细胞生长因子(FGF),等等。 FGF8的表达模式,尤其是在邻近地区表达BMP4和SHH。这种表达模式与发展的互动,以促进在端脑的图案一致。
在这里,我们提供的视觉示范在其中OVO准备一个可以用来测试在形成前脑Fgfs的影响的方法。珠涂有蛋白质和发展中的神经管提供持续的曝光。因为程序使用小,小心地放在珠,这是微创,并允许被放置在一个单一的神经管几个珠子。此外,该方法可以使胚胎可以在一个比较成熟的的阶段分析,以检测在解剖学和神经图案的变化,持续发展。这一简单实用的协议允许实时成像。它提供了一种手段,使内源性蛋白水平的空间和时间有限的修改。
根据您要使用的蛋白质,有不同的协议,关于如何准备珠。在这些实验中,我们使用肝素丙烯酸珠,但也可用于阿菲 – 凝胶珠。我们发现,肝素丙烯酸珠更容易操纵在水环境中的卵白蛋白。珠蛋白质在5升浸泡在4 ° C过夜控制珠被放置在无菌PBS,直到放置时间。在使用OVO准备的优点是,胚胎仍然活着,和自由发展通常为1。虽然保存在其中的一个外植体的环境,可用于特定变量控制的,活的胚胎允许的<…
The authors have nothing to disclose.