Incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il Duct Wharton

Summary

Un protocollo per l'incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il dotto di Wharton è descritto. Per questo esperimento, la soluzione trypan blu è usato come un tintore per dimostrare quanto questa tecnica offre efficacemente infusi nella ghiandola mirati, e di suggerire l'affidabilità di questo nuovo approccio clinico come un potenziale farmaco / terapia cellulare per la rigenerazione delle ghiandole salivari.

Abstract

Grave ipofunzione della ghiandola salivare si trova frequentemente nei pazienti con sindrome di Sjögren e quelli che ricevono l'irradiazione terapeutica nella loro testa e del collo per il trattamento del cancro. Entrambi i gruppi di sintomi esperienza pazienti come xerostomia (secchezza delle fauci), disfagia (compromissione della masticazione e della deglutizione), gravi carie dentale, alterazione del gusto, oro-faringeo infezioni (candidosi), mucosite, dolore e disagio.

Un approccio innovativo della medicina rigenerativa per il trattamento delle ghiandole salivari ipo-funzione è speculato in RS Redman, E Mezey et al 2009:. Cellule staminali possono essere depositati direttamente dal incannulazione nella ghiandola come metodo potente nel far rivivere le funzioni della compromissione organo. Presumibilmente, le cellule staminali migrati stranieri differenziarsi in cellule ghiandolari a funzionare come parte della ghiandola salivare ospite. Inoltre, questa tecnica di incannulazione è un metodo di consegna conveniente ed efficace per l'applicazione clinica di trasferimento genico.

Qui si illustrano i passaggi necessari per eseguire la procedura incannulazione sulla ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il dotto di Wharton (Fig. 1). C3H topi (Charles River, Montreal, QC, Canada) vengono utilizzati per questo esperimento, che sono stati tenuti in condizioni di pulizia convenzionali alla risorsa McGill University centro animale. Tutti gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato di Animal Care Università ed erano in linea con gli orientamenti del Consiglio canadese di prodotti per animali.

Per questo esperimento, una soluzione trypan blu è infusa nella ghiandola attraverso l'apertura del canale della Wharton usando una siringa per insulina con una 29-gauge racchiuso all'interno di un tubo in polietilene. Successivamente, il mouse è sezionato per mostrare che le infusioni migrati nella ghiandola con successo.

Protocol

1. Descrizione procedurali Iniettare per via sottocutanea 1 ml / g di peso corporeo di 0,5 mg / ml monoidrato atropina solfato (Cat # 11330, Fluka, USA) in ogni mouse per evitare che le secrezioni salivari di compromettere il movimento delle infusioni. Anestetizzare ogni mouse con 1 peso corporeo microlitri / g di un mg / 100 ml di ketamina e 20 mg / ml xylazina (Phoenix scientifico, AR, USA) soluzione iniettata intraperitoneale (IP) Posizionare il mouse su una mi…

Discussion

Una difficoltà con questo metodo incannulazione è quello di impedire il riflusso della soluzione iniettata. Anche se la soluzione trypan blu ha temporaneamente migrato nella ghiandola salivare con successo, la secrezione della saliva potrebbe interferire con le infusioni e causare riflusso della soluzione trypan blu fuori della ghiandola. Come precauzione, oltre a utilizzare atropina per inibire la secrezione di saliva, la cannula di polietilene dovrebbero rimanere nel canale della Wharton e il pistone della siringa d…

Materials

Name of the reagent	Type	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250