Laser Capture Mikrodissektion von Säugetiergewebe

Abstract

Laser Capture-Mikroskopie, die auch als Laser-Mikrodissektion (LMD) bekannt ist, ermöglicht dem Benutzer, eine kleine Anzahl von Zellen oder Geweben von gefrorenen oder Formalin-fixierten, in Paraffin eingebettete Gewebeschnitte zu isolieren. LMD-Techniken beruhen auf einer hitzelabiler Membran entweder oben auf gelegt, oder unter der Gewebeschnitt. In einem Verfahren wird fokussierten Laser Energie verwendet, um die Membran auf die darunter liegenden Zellen, die dann aus dem Gewebe Abschnitt aufgehoben werden können schmelzen. In den anderen, verdampft die Laserenergie die Folie entlang eines Pfades "gezeichnet" auf das Gewebe, so dass die markierten Zellen in eine Auffangeinrichtung fallen. Jede Technik ermöglicht die Auswahl von Zellen mit einer minimalen Auflösung von einigen Mikrometern. DNA, RNA-, Protein-und Lipid-Proben isoliert und analysiert werden von der Mikro-seziert Proben. In diesem Video zeigen wir die Verwendung des Leica AS LMD-Lasermikrodissektion Instrument in sieben Segmente, darunter eine Einführung in die Prinzipien der LMD, die Initialisierung des Gerätes für den Einsatz, allgemeine Überlegungen zur Probenvorbereitung, die Montage der Probe und der Einrichtung erfassen Rohre , Ausrichten des Mikroskops, die Anpassung der Aufnahme kontrolliert, und die Erfassung Gewebeproben. Laser-Capture-Mikrodissektion ermöglicht die Ermittler Proben des reinen Zellpopulationen so klein wie ein paar Zell-Äquivalenten zu isolieren. Dies ermöglicht die Analyse von Zellen von Interesse, die frei von benachbarten Verunreinigungen, die experimentellen Ergebnisse verfälschen können sind.