Мышь глаз Энуклеация для удаленного высокой пропускной Фенотипирование
Summary
Техника рассечения иллюстрирует энуклеации глаза мыши для фиксации тканей для выполнения фенотипирование в высокой пропускной способности экранов.
Abstract
Мышь глаз является важной генетической модели для поступательного изучения человеческих болезней глазной. Blinding заболеваний человека, таких как дегенерация желтого пятна, фоторецептор дегенерации, катаракты, глаукомы, ретинобластома, и диабетической ретинопатии были обобщены в трансгенных мышей. 1-5 большинства трансгенных и нокаутных мышей были получены в лабораториях для изучения без глазных заболеваний, но сохранения генетических ресурсов между системами органов предполагает, что многие из тех же генов также могут играть определенную роль в развитии глаз и болезни. Таким образом, эти мыши представляют собой важный ресурс для открытия новых генотип-фенотип корреляции в глаза. Потому что эти мыши разбросаны по всему миру, трудно приобретать, сохранять, и фенотип их в эффективные, экономически эффективным образом. Таким образом, наиболее высокую пропускную способность экранов офтальмологической фенотипирование ограничены несколько мест, которые требуют на месте, глазные экспертизы для изучения глаза в живых мышей. 6-9 альтернативный подход, разработанный нашей лаборатории является методом для удаленного ткани приобретения, которые могут использоваться в больших или малых масштабах исследования трансгенных мышей глаза. Стандартизированных процедур для видео-хирургической передаче навыков, ткани фиксации и доставки позволяют любой лаборатории, чтобы собрать весь глаз от мутантных животных и отправить их на молекулярном и морфологическом фенотипирования. В этом видео статье мы представляем методы выяснять и передавать как нефиксированные и перфузии фиксированной глазах мышь для удаленного анализа фенотипа.
Protocol
Discussion
Большинство трансгенных мышей существуют в лабораториях, которые не рассматривают глаза. Наше видео техника иллюстрирует простой, стандартизированный метод для удаленной передачи хирургических навыков для оптимизации ткани приобретение из лабораторий с небольшим опытом работы с г?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Исследования по профилактике слепоты; Бартли J. Mondino MD, директор Jules Stein Eye Institute, Лос-Анджелесе, и Рамиро Рамиреса-Солис, Джеки белый, и Жанна Estabel в Sanger института Wellcome Trust генома Campus. Это исследование соответствует ARVO Заявление для использования животных в офтальмологический и визуальных исследований.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
References
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).
- Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. . In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice. Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).
- Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus. Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).
- Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology. Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).
- Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase. Science. 272, 1026-1029 (1996).
- Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness. Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).
