人間の毛包から神経堤幹細胞の単離および培養
Summary
この記事では、人間の毛包からの神経堤幹細胞の単離および培養のための堅牢なプロトコルを提案する。
Abstract
毛包は、生涯成長を受け、毛周期は、幹細胞の増殖と休止を伴うよく制御されたプロセスである。髪の膨らみは、成体幹細胞1のためのよく特徴付けニッチです。外毛根鞘のこのセグメントは、上皮幹細胞2、色素幹細胞3と4-7幹細胞のような神経堤幹細胞を含む、さまざまな種類の数が含まれています。毛包は、ヒト幹細胞の種類ごとにアクセス可能で、豊富な情報源を表しています。我々や他のは、人間の胎児と成人の毛包からの神経堤幹細胞（NCSCs）4,5単離した。これらのヒト幹細胞は、ラベル保細胞であり、in vitroにおける非対称細胞分裂を介して自己複製することが可能である。彼らは未熟な神経堤細胞のマーカーではなく、分化マーカーを発現している。当社の発現プロファイリングのための研究では、彼らがマウス皮膚未熟な神経CREと同様の遺伝子発現パターンを共有していることを示したstの細胞。彼らは 、in vitroクローン単一細胞培養での後、筋原性メラニン細胞、および神経細胞系譜を生じさせることができるクローンの多能性を示す。分化した細胞は、系統特異的マーカーを取得するだけでなく、ex vivoでの条件で適切な機能を発揮しないだけ。さらに、これらのNCSCsは間葉系統に向かって分化能を示しています。分化した神経細胞は、マウスの脳に固執し、ニューロンの分化マーカーを保持することができます。それは髪がNCSCsが神経再生を助けることができる派生卵胞、そして、彼らはtransecting脊髄損傷8以下、これらの幹細胞を移植したマウスの運動機能を改善することが示されている。さらに、末梢神経は、幹細胞移植片9と、押しつぶさ坐骨神経に隣接する皮膚由来前駆細胞の移植で修復されました再ミエリン10をもたらした。そのため、毛包/皮膚由来NCSCsはすでにRのための有望な結果が示されている前臨床モデルでegenerative療法。
人工多能性幹（iPS）細胞に再プログラミング体細胞は、再生医療のための巨大な可能性を示している。しかし、癌遺伝子/ウイルス統合および多能性幹細胞の潜在的な発癌性の長期的な効果が十分に対処されていない特に、iPS細胞に関する多くの問題は、まだあります。 iPS細胞は再生医療に使用することができます前に、克服すべき多くのハードルが残っています。成体幹細胞は、安全であることが知られており、それらはそのような骨髄移植のように、長年にわたり臨床的に使用されなければならないということです。多くの患者は、すでに治療の恩恵を受けている。自家成体幹細胞はまだ移植に適した細胞である。したがって、ヒトの皮膚/毛包において容易にアクセス可能で、拡張可能な成体幹細胞は、再生医療のための貴重な情報源です。
Protocol
Discussion
記載の細胞単離および培養方法は再現性があり、堅牢です。私たちは、幅広い年齢層を横断して、個人の数十からNCSCsを生成している。それが右の組織の収穫後に組織を処理するのが最善の方法ですが、私たちは、頭皮の組織が安全に、細胞生存率への影響を最小限に抑えて一晩輸送のための氷の上でメディアに格納することができることがわかった。
抗生物質で、頭皮…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHの助成金R01AR054593とXuへR01AR054593-S1でサポートされています。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| DMEM | Invitrogen | 11965-092 |
| DMEM/F12 | Invitrogen | 11330-32 |
| Heat-inactivated FBS | Hyclone | SH30071.03 |
| B27 supplement | Invitrogen | 17504044 |
| N2 supplement | Invitrogen | 17502048 |
| bFGF | Invitrogen | PHG0026 |
| EGF | R&D system | 236-EG-01M |
| IGF-I | R&D system | 291-G1-050 |
| 0.05% Trypsin/EDTA | Invitrogen | 25300-054 |
| Dispase | Invitrogen | 17105041 |
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15070063 |
Table 1.
References
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