Développement d'une manière unilatérale-lésés 6-OHDA modèle murin de la maladie de Parkinson

Summary

Un protocole pour effectuer unilatérales de 6-OHDA lésions du faisceau médian du cerveau antérieur chez la souris est décrite. Cette méthode a un faible taux de mortalité (13,3%) avec 89% des animaux qui ont survécu montrant la perte de> 95% de la dopamine striatale et 90,63 ± -4,02% biais ipsiversive rotation vers le côté de la lésion.

Abstract

Le unilatéralement lésée 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lésé modèle de rat de la maladie de Parkinson (PD) s'est avérée précieuse pour faire progresser notre compréhension des mécanismes sous-jacents des symptômes parkinsoniens, car elle récapitule les changements dans les circuits des noyaux gris centraux et de la pharmacologie observée dans patients parkinsoniens ^1-4. Toutefois, les changements précis cellulaires et moléculaires qui se produisent au niveau des synapses cortico-striatales des voies de sortie dans le striatum, qui est la région d'entrée majeure de ganglions de la base restent insaisissables, et ceci est considéré comme site où des anomalies pathologiques sous-jacents symptômes parkinsoniens se posent ^{3 , 5.}

Dans la MP, la compréhension des mécanismes sous-jacents des changements dans la dégénérescence des ganglions circuits de base suivante de la voie nigro-striatale a été grandement améliorée grâce au développement des chromosomes bactériens artificiels (BAC) au cours des souris exprimant des protéines fluorescentes vertes entraînées par la promotion^8, leur permettant d'être étudié de manière isolée:;: spécifique pour les deux voies de sortie du striatum (EGFP-D2 et eGFP-A2a voie indirecte EGFP-D1 voie directe) rs. Par exemple, des études récentes ont suggéré que des changements pathologiques dans la plasticité synaptique chez la souris parkinsoniens ^9,10. Cependant, ces études utilisées chez les souriceaux et des modèles aigus de parkinsonisme. Il est difficile de savoir si les changements décrits chez des rats adultes avec stables 6-OHDA lésions se produisent également dans ces modèles. D'autres groupes ont tenté de générer une écurie unilatéralement lésée 6-OHDA modèle de souris adulte de PD par lesioning le faisceau médian du cerveau antérieur (MFB), malheureusement, le taux de mortalité dans cette étude était extrêmement élevé, avec seulement 14% survivent la chirurgie pour le 21 jours ou plus ^11. Des études plus récentes ont généré des lésions intra-nigrales à la fois avec un taux de mortalité faible perte> 80% des neurones dopaminergiques, mais l'expression de la L-DOPA dyskinésie induite par ^11,12,13,14 était variabledans ces études. Un autre modèle de souris bien établi de maladie de Parkinson est la souris MPTP lésé ^15. Alors que ce modèle s'est avéré utile dans l'évaluation des potentiels agents neuroprotecteurs ^16, il est moins approprié pour comprendre les symptômes mécanismes sous-jacents de PD, comme ce modèle échoue souvent à induire des déficits moteurs, et montre une grande variabilité de l'étendue de la lésion ^{17, 18} .

Ici, nous avons développé un modèle de stabilité unilatérale de la souris 6-OHDA-lésé de PD par l'administration directe de la 6-OHDA dans le MFB, ce qui provoque toujours une perte> 95% de la dopamine striatale (tel que mesuré par HPLC), ainsi que la production du comportement déséquilibres observés dans le modèle bien caractérisé chez le rat unilatérale de 6-OHDA-lésé de PD. Ce modèle de souris nouvellement développé du PD se révélera un outil précieux dans la compréhension des mécanismes sous-jacents génération des symptômes parkinsoniens.

Protocol

1. Logement et la préparation de souris Maintenir une colonie de chromosomes bactériens artificiels (BAC) entraîné des souris transgéniques 8 (souris mutante de ressources du Centre régional (MMRRC) FVB dans une 12:12 h cycle lumière-obscurité avec un accès libre à la nourriture et l'eau. Ces souris sont des souris FVB pure, et il n'est pas nécessaire de traverser ces souris avec une autre souche, soit pour des fins de reproduction, ou pour assurer le succès de la procédure de …

Discussion

Ce protocole décrit une méthode pour la génération d'un modèle stable de la souris unilatérale de 6-OHDA-lésé de la maladie de Parkinson, qui est extrêmement reproductible, avec un taux de réussite lésion de haut, et un faible taux de mortalité. Le succès de l'opération lésion 6-OHDA peut être facilement estimée par la mesure de comportement en rotation spontanée ayant plus de 70% des rotations ipsiversive indicatifs de> 95% appauvrissement dopamine dans le striatum lésé ^27. Qua…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
desipramine HCl	Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada	D125	25mg/kg
pargyline HCl	Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada	P8013	5mg/kg
6-OHDA HBr	Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada	H116	3mg / mouse
stereotaxic Frame	Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	Model 900
mouse ear cups	Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	Model 921 Zygoma Ear Cups
mouse incisor bar	Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	Model 923B
mouse anaesthesia mask	Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	Model 923B
priming kit (containing 250ml syringe)	Hamilton Company, Reno, NV, USA	PRMKIT 81120
RN compression fitting kit (1 mm)	Hamilton Company, Reno, NV, USA	55750-01
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch)	Hamilton Company, Reno, NV, USA	55751-01
dual small hub RN Coupler	Hamilton Company, Reno, NV, USA	55752-01
luer to small hub RN adaptor	Hamilton Company, Reno, NV, USA	55753-01
1ml 25S syringe model 7001KH	Hamilton Company, Reno, NV, USA	80100
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel	Hamilton Company, Reno, NV, USA	7803-05
Scissors	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada.	14084-08
Scalpel	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada	10003-12
Scalpel blades	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada	10035-20
Forcep	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada	11608-15
Hemostats	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada.	13004-14
Isoflurane	Abbot	02241315	2-3%
Suters (Vicryl 4.0)	Syneture	SS-683
Steriliser	Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada	18000-45
Infusion Pump	Harvard Apparatus	PhD 22/2000
Needles (27G)	Becton Dickinson	305109
Needles (25G)	Becton Dickinson	305127
Syringes (1ml)	BD syringe	309692
Anaesthesia trolley	LEI medical	M2000
Baytril	CDMV, St. hyacinthe, QC	102207
Lidocaine	CDMV, St. hyacinthe, QC	3914
Betadine solution	CDMV, St. hyacinthe, QC	19955