パーキンソン病の単方向、病変6-OHDAモデルマウスの開発
Summary
マウスの内側前脳束の片側6-OHDAの病変を行うためのプロトコルが記述されています。このメソッドは、線条体ドーパミンと90.63の> 95％の損失を示す生存動物の89％と低い死亡率（13.3％）±-4.02％病変の側に向かってipsiversive回転バイアスを持っています。
Abstract
パーキンソン病（PD）の一方的病変6 hyroxydopamine（6-OHDA） – 病変ラットモデルは、それが反復するで観察された大脳基底核回路と薬理学の変化をするので、パーキンソン症状の根底にあるメカニズムの理解を進める上で貴重であることが証明されているパーキンソン病患者の1-4。しかし、大脳基底核の主要な入力領域である線条体、内の出力経路の皮質-線条体シナプスで発生した正確な細胞および分子の変化は、とらえどころのないまま、これはパーキンソン病の症状の根底にある病理学的な異常が3を発生するサイトであると考えられている5。
PDでは、黒質 – 線条体経路の変性後に大脳基底核回路の変化のメカニズムを理解することが大幅に細菌人工染色体（BAC）マウスの開発促進によって駆動される過剰発現緑色蛍光タンパク質によって進められてきたそれらを分離して検討することができます8、：;：2線条体出力経路（EGFP-D2とEGFP-リパーゼA2a、間接的な経路EGFP-D1直接経路）の特定にはサインインしてください。たとえば、最近の研究では、パーキンソン病マウス9,10におけるシナプス可塑性の病理学的変化があることを示唆している。しかし、これらの研究は、若年マウスとパーキンソニズムの急性モデルを利用した。それは安定した6-OHDA病変を有する成人ラットでは説明した変更も、これらのモデルで発生するかどうかは不明である。他のグループが内側前脳束（MFB）をlesioning PDの安定した一方、病変6-OHDAの大人のマウスモデルを生成しようとしています、残念なことに、本研究では死亡率はわずか14％は21の手術を生き残ったと、非常に高かった日以上11。最近の研究は、低死亡率の両方で、イントラ黒質病変を生成したドーパミン作動性ニューロンの> 80％の損失、L-DOPA誘発ジスキネジア11,12,13,14のしかし、式は変数であったこれらの研究インチPDの別の十分に確立されたマウスモデルでは、MPTP-病変マウス15である。このモデルは、潜在的な神経保護剤16の評価に有用であることが証明されたこのモデルは頻繁に運動障害を誘導するために失敗し、病変17の範囲の広い変動を示すように、それは、PDのメカニズムの基礎となる症状を理解するにはあまり適していながら、18 。
ここでは、安定した片側6-OHDA-病変マウス一貫して線条体ドーパミンの> 95％の損失が発生するMFB（HPLCにより測定）に6-OHDAの直接投与によるPDのモデルと同様に、行動を生産を開発しました不均衡はPDのよく特徴付け片側6-OHDA-病変ラットモデルで観察された。 PDは、この新しく開発されたマウスモデルでは、パーキンソン症状の発生のメカニズムを理解する上で貴重なツールを証明します。
Protocol
1。ハウジングとマウスの準備これらのマウスは、純粋なFVBマウスです。食物と水に自由にアクセスしてトランスジェニックマウスの午前12時12時間明暗サイクルで8（変異マウス地域資源センター（MMRRC）FVB駆動細菌人工染色体（BAC）のコロニーを維持し、それはどちらの繁殖目的のために、他の株で、これらのマウスを横断する、または6-OHDA病変の手順の成功を確実にする必?…
Discussion
このプロトコルは高い病変成功率、低死亡率で、非常に再現性があるパーキンソン病の安定した片側6-OHDA-病変マウスモデル生成のための方法を説明します。 6-OHDA病変の手術の成功は容易に病変線条体27の> 95％のドーパミンの枯渇を示す> 70％ipsiversive回転と自発的な回転動作を測定することにより推定することができます。それが線条体ドーパミンレベル28の直接測定を?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、外務国際貿易（カナダ政府）、トロント大学のコンノート·ファンド、イノベーション、NSERC、Krembil財団と硬化、パーキンソンの信頼のためのカナダの財団の部門によってサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
| pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
| 6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
| stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
| mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
| mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
| mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
| priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
| RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
| PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
| dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
| luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
| 1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
| *33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
| Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
| Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
| Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
| Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
| Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
| Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
| Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
| Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
| Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
| Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
| Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
| Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
| Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
| Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
| Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
| Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |
References
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Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse ModelParkinson’s DiseaseBasal Ganglia CircuitryParkinsonian SymptomsCortico-striatal SynapsesStriatumPathological AbnormalitiesNigro-striatal PathwayBacterial Artificial Chromosome (BAC) MiceGreen Fluorescent ProteinsDirect PathwayIndirect PathwaySynaptic PlasticityJuvenile MiceAcute Models Of Parkinsonism
Cite This Article
Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson’s Disease. J. Vis. Exp. (60), e3234, doi:10.3791/3234 (2012).