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의학

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

Published: February 14, 2012
doi:
10.3791/3234
, ,
1Centre for Neurobiology of Stress, Dept Biological Sciences,University of Toronto at Scarborough

Summary

생쥐의 중간 forebrain 번들의 일방적 6-OHDA의 병변을 수행하기위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 striatal 도파민과 90.63의> 95 %의 손실을 보여주는 살아남은 동물의 89 %를 낮은 사망률 (13.3 %) ± -4.02 % 병변의 측면을 향해 ipsiversive 회전 편견을 가지고 있습니다.

Abstract

그것이 recapitulates 기저 신경 회로의 변화와 약리학가 관찰한 이후 일방적으로 lesioned 6 hyroxydopamine (6-OHDA) lesioned 파킨슨병의 쥐 모델 (PD)는 parkinsonian 증상의 기초 메커니즘에 대한 우리의 이해를 발전에 귀중한 것으로 판명되었습니다 parkinsonian 환자 1-4. 다만, 기저 신경의 주요 입력 영역입니다 striatum, 내의 출력 경로의 cortico-striatal 시냅스에서 발생하는 정확한 세포와 분자 변화는 애매 남아 있으며 이것은 parkinsonian 증상을 밑에있는 병적인 이상이 3 발생할 사이트로 여겨지고 5.

경찰서에서 nigro-striatal 경로의 기저 신경 회로를 다음과 변성 변화의 기본 메커니즘을 이해하는 것은 크게 촉진에 의한 지나친 표현 녹색 형광 단백질은 세균 인공 염색체의 개발 (BAC) 생쥐하여 고급되었습니다그들은 고립에서 공부 수 있도록 8, :; : 두 striatal 출력 경로 (eGFP-D2와 eGFP-A2a 간접 경로 eGFP-D1 직접 경로)에 대한 구체적인 RS. 예를 들어, 최근의 연구 parkinsonian 마우스 9,10의 시냅스 소성의 병리 학적 변화가있다는 것을 제안했습니다. 그러나 이러한 연구는 청소년 생쥐와 parkinsonism의 급성 모델을 활용. 그것은 안정적인 6-OHDA의 병변과 성인 쥐에 설명된 변경 사항은 또한 이러한 모델에서 발생하는지 불분명하다. 다른 그룹은 중간 forebrain 번들 (MFB)을 lesioning하여 경찰의 안정 일방적-lesioned 6-OHDA 성인 마우스 모델을 생성하기 위해 시도했습니다 .. 안타깝게도,이 연구에서 사망률이 겨우 14 %가 21 수술을 이겨낸과 함께 매우 높은였다 일 이상 11. 더 많은 최근 연구에서 낮은 사망률 모두 함께 내부 nigral 병변을 올렸습니다 dopaminergic 뉴런의> 80 % 감소, L-DOPA 유도 운동 이상증 11,12,13,14 중 단 표현이 변수였다이러한 연구 인치 경찰의 또 다른 잘 확립 마우스 모델은 MPTP-lesioned 마우스 15입니다. 이 모델은 잠재 neuroprotective 요원 16 평가에서 유용하게 입증되었습니다하는 동안, 그것은이 모델은 종종 모터 적자를 유도하는 데 실패로 경찰의 메카니즘 밑에 증상을 이해하는 데 덜 적합하고, 병변 17 정도, 18의 넓은 다양성을 보여줍니다 .

여기에서 우리는 지속> 95 % striatal 도파민의 손실 (등 HPLC로 측정)뿐만 아니라 행동을 생산의 원인이 MFB,에 6-OHDA를 직접 관리하여 경찰의 안정 일방적 6-OHDA-lesioned 마우스 모델을 개발 불균형은 경찰의 잘 특성화 일방적 6-OHDA-lesioned 쥐 모델에서 관찰했다. 경찰이 새롭게 개발한 마우스 모델 parkinsonian 증상 세대의 기본 메커니즘을 이해하는 데 유용한 도구를 새삼 느끼게 될 것이다.

Protocol

1. 주택과 생쥐의 준비 형질 전환 생쥐에게 8 (음식과 물을 무료로 이용할 수있는 12시 12분 H 빛을 어두운주기에 돌연변이 마우스 지역 리소스 센터 (MMRRC) FVB를 구동 세균 인공 염색체 (BAC)의 식민지를 유지합니다.이 쥐가 순수 FVB 마우스 있으며, 그것은 목적 번식하거나, 다른 변형들과 이들 생쥐를 건너 필요가 없습니다, 또는 6-OHDA 병변 절차의 성공을 보장하기 위해. parkinso…

Discussion

이 프로토콜은 높은 병변 성공률과 낮은 사망률로, 극단적으로 재현할 수있다 파킨슨병의 안정 일방적 6-OHDA-lesioned 마우스 모델의 생성을위한 방법을 설명합니다. 6-OHDA 병변 수술의 성공은 쉽게 lesioned striatum 27> 95 %의 도파민 고갈 지표> 70 % ipsiversive의 회전과 함께 자발적인 회전 동작의 측정에 의해 추정 할 수 있습니다. 그것이 striatal 도파민 레벨 28 직접 측정을 제공으로 str…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 외교 계열과 국제 무역 (캐나다 정부), 토론토 Connaught 펀드, 혁신, NSERC, Krembil 재단과 치료 파킨슨병 Trust와 캐나다 재단의 대학에 의해 지원되었다.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
desipramine HCl Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada D125 25mg/kg
pargyline HCl Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada P8013 5mg/kg
6-OHDA HBr Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada H116 3mg / mouse
stereotaxic Frame Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA Model 900  
mouse ear cups Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA Model 921 Zygoma Ear Cups  
mouse incisor bar Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA Model 923B  
mouse anaesthesia mask Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA Model 923B  
priming kit (containing 250ml syringe) Hamilton Company, Reno, NV, USA PRMKIT 81120  
RN compression fitting kit (1 mm) Hamilton Company, Reno, NV, USA 55750-01    
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) Hamilton Company, Reno, NV, USA 55751-01  
dual small hub RN Coupler Hamilton Company, Reno, NV, USA 55752-01    
luer to small hub RN adaptor Hamilton Company, Reno, NV, USA 55753-01    
1ml 25S syringe model 7001KH Hamilton Company, Reno, NV, USA 80100  
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel Hamilton Company, Reno, NV, USA 7803-05  
Scissors Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. 14084-08  
Scalpel Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada 10003-12  
Scalpel blades Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada 10035-20  
Forcep Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada 11608-15  
Hemostats Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. 13004-14  
Isoflurane Abbot 02241315 2-3%
Suters (Vicryl 4.0) Syneture SS-683  
Steriliser Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada 18000-45  
Infusion Pump Harvard Apparatus PhD 22/2000  
Needles (27G) Becton Dickinson 305109  
Needles (25G) Becton Dickinson 305127  
Syringes (1ml) BD syringe 309692  
Anaesthesia trolley LEI medical M2000  
Baytril CDMV, St. hyacinthe, QC 102207  
Lidocaine CDMV, St. hyacinthe, QC 3914  
Betadine solution CDMV, St. hyacinthe, QC 19955  
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References

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Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson’s Disease. J. Vis. Exp. (60), e3234, doi:10.3791/3234 (2012).
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