Ett protokoll för att utföra ensidigt 6-OHDA-lesioner i den mediala forebrain bundle i möss beskrives. Denna metod har en låg dödlighet (13,3%) med 89% av de överlevande djuren visade> 95% förlust av striatal dopamin och 90,63 ± -4,02% ipsiversive roterande inriktning mot sidan av lesionen.
Den ensidigt lesion 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-skadade råttmodell av Parkinsons sjukdom (PD) har visat sig vara ovärderligt för att föra vår förståelse av mekanismerna bakom parkinsonsymtom, eftersom den sammanfattas de förändringar i basala ganglierna kretsar och farmakologi observerats i patienter med Parkinsons sjukdom 1-4. Men de exakta cellulära och molekylära förändringar som sker vid kortiko-striatala synapser för de utgående vägar inom striatum, vilket är den största ingången regionen i basala ganglierna förblir svårfångad, och detta tros vara platsen där patologiska avvikelser som ligger bakom parkinsonsymtom uppstår 3 , 5.
I PD, har förstå de mekanismer som ligger bakom förändringarna i basala ganglierna kretsar efter degeneration av Nigro-striatala vägen blivit mycket fram genom utvecklingen av bakteriell artificiell kromosom (BAC) möss över uttrycker gröna fluorescerande proteiner som drivs av att främjars specifika för de två striatala utgående vägar (direkt väg: EGFP-D1, indirekta vägen: EGFP-D2 och EGFP-A2a) 8, vilket gör att de kan studeras isolerat. Till exempel har senare studier antytt att det finns sjukliga förändringar i synaptisk plasticitet i Parkinson möss 9,10. Men dessa studier utnyttjas unga möss och akuta modeller av parkinsonism. Det är oklart om de förändringar som beskrivs i vuxna råttor med stabila 6-OHDA lesioner förekommer även i dessa modeller. Andra grupper har försökt skapa en stabil ensidigt-skadade 6-OHDA modell vuxen mus av PD genom att skada den mediala framhjärnan bunt (MFB), tyvärr var dödligheten i denna studie extremt hög, med endast 14% överlevande operationen för 21 dagar eller längre 11. Nyare studier har genererats inom nigrala lesioner med både en låg dödlighet> 80% förlust av dopaminerga neuroner, men expression av L-DOPA-inducerad dyskinesi 11,12,13,14 var variabeli dessa studier. En annan väl etablerad musmodell av PD är den MPTP-lesionerad mus 15. Även denna modell har visat sig användbar vid bedömningen av potentiella nervskyddande ämnen 16, är det mindre lämpligt för att förstå mekanismerna bakom symtom på PD, eftersom denna modell ofta misslyckas med att framkalla motoriska brister, och visar en bred variation i omfattningen av skadan 17, 18 .
Här har vi utvecklat en stabil unilaterala 6-OHDA-skadade musmodell av PD genom direkt administrering av 6-OHDA i MFB, som genomgående ger> 95% förlust av striatal dopamin (mätt med HPLC), såväl som framställning av beteendemässiga obalanser observerades i väl karaktäriserade unilaterala 6-OHDA-skadade råttmodell av PD. Denna nyutvecklade musmodell av PD kommer att visa sig vara ett värdefullt verktyg för att förstå mekanismerna bakom generation parkinsonsymtom.
Detta protokoll beskriver en metod för generering av en stabil unilaterala 6-OHDA-skadade musmodell av Parkinsons sjukdom, som är extremt reproducerbar, med en hög lesion framgång, och en låg dödlighet. Framgången av 6-OHDA-lesionen kirurgi kan lätt uppskattas genom mätning av spontan rotationsbeteende med> 70% ipsiversive rotationer som indikerar> 95% dopaminbrist i den skadade striatum 27. Kvantifiering av striatala dopaminnivåer är de mest exakta mätningen av graden av striatal dopamin re…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av utrikesdepartementet och internationell handel (Kanadas regering), University of Toronto Connaught fonden, den kanadensiska stiftelsen för innovation, NSERC den Krembil Foundation och Cure Parkinsons Trust.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |