الاستقراء والرصد من فرط الحساسية المتأخرة نوع بالتبني في الفئران
Summary
تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة الخلايا الليمفاوية الذاكرة CCR7 – المستجيب (تيم) تي. نحن هنا لشرح كيفية تنشيط خلايا محددة مستضد TEM ، لحث DTH بالتبني في الفئران لويس ومراقبة الاستجابة للالتهابات.
Abstract
تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة CCR7 – المستجيب الخلايا اللمفية تي الذاكرة التي اختراق موقع من حقن ضد مستضد التي كانت تستعد للنظام المناعي. ويتسم رد فعل التهابية بواسطة احمرار وتورم في موقع التحدي مستضدي. ذلك هو نموذج مناسب لتحديد فعالية في الجسم الحي للمناعة. يمكن أن يتسبب DTH الجلدي إما عن طريق نقل بالتبني من الخلايا الليمفاوية T مستضد محددة أو عن طريق التحصين النشط مع مستضد ، وتحديا لاحقة مع الأدمة للمستضد للحث على رد فعل التهابية في منطقة الجلد معين. يمكن أن يتسبب ردود DTH لمستضدات مختلفة ، على سبيل المثال ovalbumin ، التوبركولين ، التيتانوس ، أو ثقب المفتاح هيموسيانين اللزيق. ويمكن أيضا أن يتسبب مثل هذه التفاعلات ضد مستضد ذاتي ، على سبيل المثال لبروتين النخاعين الأساسي (MBP) في الفئران التي يسببها التهاب الدماغ و النخاع مع التجريبية الذاتية مع MBP ، نموذج حيواني لمرض التصلب المتعدد (1). نحن هنا لشرح كيفية تحفيز رد فعل بالتبني DTH في الفئران لويس. فإننا سوف تحفز الخلايا التائية first ovalbumin محددة في المختبر ، وحقن هذه الخلايا intraperitoneally تفعيلها للفئران ساذجة. بعد السماح للخلايا للتوازن في الجسم الحي لمدة 2 يوم ، فإننا سوف تحد من الفئران مع ovalbumin في الصيوان للأذن واحدة ، في حين أن الأذن الأخرى فيل تلقي المالحة. سيكون رد فعل التهابية تكون مرئية 3-72 ساعات في وقت لاحق ، وسيتم قياس سماكة الأذن كمؤشر لشدة DTH.
Protocol
Discussion
ويمكن أيضا التحدي مستضدي أن يؤديها في مواقع أخرى ، على سبيل المثال في جلد الظهر (2). ومع ذلك نجد أن التحدي. استخدام الصيوان للأذن ، كما هو مبين في هذا الفيديو ، ويسمح لقياس أكثر دقة للتفاعل DTH.
Acknowledgements
نشكر الدكتور الكسندر Flugel (Martinsried والمانيا) لتزويدنا GFP المسمى ، ovalbumin محددة خط الخلايا التائية المستخدمة في هذا البروتوكول.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco/Invitrogen | 12430-062 | 500ml | |
| Sodium pyruvate | Sigma | S8636 | 1 mM final, in Stimulation medium | |
| Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine | Cambrex/BioWhittaker | 17-718R | 100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium | |
| Non essential amino acids | Sigma | R7131 | NEAA, 1% final, in Stimulation Medium | |
| RPMI vitamins | Sigma | R7256 | 1% final, in Stimulation medium | |
| beta-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | 2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium | |
| Syngeneic rat serum | 1% final. See explanation in Protocol. | |||
| Ovalbumin | Sigma | A5503 | 10 µg/ml final, in Stimulation Medium. |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 166-936 (2001).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of active delayed type hypersensitivity (DTH)in rats. J Vis Exp. (5), (2007).
