L'induction et la surveillance des parents adoptifs hypersensibilité de type retardé chez les rats

Summary

Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-effectrices T mémoire (TEM) des lymphocytes. Ici nous démontrons comment activer les cellules spécifiques de l'antigène TEM, induisent SRD adoptifs chez le rat Lewis et de surveiller la réponse inflammatoire.

Abstract

Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire qui infiltrent le site de l'injection d'un antigène contre lequel le système immunitaire a été amorcée. La réaction inflammatoire est caractérisée par une rougeur et une enflure du site de stimulation antigénique. C'est un modèle pratique pour déterminer l'efficacité in vivo d'immunosuppresseurs. SRD cutanée peut être induite soit par transfert adoptif de lymphocytes T spécifiques d'antigènes ou par l'immunisation active avec un antigène, et les suivantes défi intradermique avec l'antigène pour induire la réaction inflammatoire dans une zone de peau donnés. Réponses DTH peuvent être induites à des antigènes différents, par exemple pour l'ovalbumine, la tuberculine, anatoxine tétanique, ou hémocyanine de patelle. Ces réactions peuvent aussi être induite contre les autoantigènes, par exemple pour la protéine de myéline de base (MBP) chez le rat avec l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale induite par le MBP, un modèle animal de sclérose en plaques (1). Ici nous démontrons comment induire une réaction adoptifs SRD chez le rat Lewis. Nous allons d'abord stimuler les cellules T spécifiques de l'ovalbumine, in vitro et injecter ces cellules activées par voie intrapéritonéale à des rats naïfs. Après avoir laissé les cellules in vivo pour s'équilibrer pendant 2 jours, nous mettra au défi les rats avec de l'ovalbumine dans le pavillon d'une oreille, tandis que l'autre oreille wil recevez saline. La réaction inflammatoire sera visible 3-72 heures plus tard et l'épaisseur de l'oreille va être mesurée comme une indication de la gravité de SRD.

Protocol

1. La stimulation des lymphocytes T spécifiques d'ovalbumine Repos ovalbumine cellules T spécifiques sont stimulés avec de l'ovalbumine en présence des thymocytes irradiés de rats Lewis (30 Gy) comme des cellules présentatrices d'antigènes (APC), en milieu de stimulation (Préparer dans du DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA RPMI Vitamines + + 2ME sérum de rat + ovalbumine, à la concentration finale noté dans la liste des matériaux.) Préparati…

Discussion

La stimulation antigénique peut également être effectuée à d'autres sites, par exemple dans la peau du dos (2). Nous avons cependant trouvé que la contestation. Utilisation du pavillon de l'oreille, comme le montre cette vidéo, permet la mesure la plus précise de la réaction de DTH.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.