אינדוקציה וניטור של רגישות יתר מושהית-Type המאמצת בחולדות
Summary
סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל זיכרון T (TEM) לימפוציטים. כאן אנו מדגימים כיצד להפעיל את אנטיגן ספציפי לערמונית תאים TEM, לגרום DTH המאמצת בחולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.
Abstract
סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-T לימפוציטים מפעיל זיכרון לחדור את האתר של הזרקה של אנטיגן נגד שבו המערכת החיסונית כבר דרוך. התגובה הדלקתית מאופיין אדמומיות ונפיחות של האתר של אתגר antigenic. זהו מודל נוח על מנת לקבוע את ביעילות vivo של מערכת החיסון. DTH עורית יכול להיגרם גם על ידי העברת המאמצת של אנטיגן ספציפי לערמונית לימפוציטים מסוג T או על ידי חיסון פעיל עם אנטיגן, והאתגר intradermal הבאים עם האנטיגן לעורר תגובה דלקתית באזור העור נתון. התגובות DTH יכול להיגרם אנטיגנים שונים, ovalbumin למשל, טוברקולין, טטנוס toxoid, או hemocyanin חור המנעול עלוקה. תגובות כאלה יכולות להיגרם גם נגד autoantigen, למשל חלבון המיאלין הבסיסי (MBP) בחולדות עם ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis המושרה עם MBP, מודל חיה עבור טרשת נפוצה (1). כאן אנו מדגימים כיצד לגרום תגובת DTH המאמצת של לואיס חולדות. אנחנו יהיה הראשון לעורר ovalbumin ספציפי בתאי T במבחנה להזריק intraperitoneally תאים אלה מופעלים על חולדות נאיבי. לאחר המאפשר לתאים לאזן in vivo עבור 2 ימים, נוכל לאתגר חולדות עם ovalbumin ב פינה של באוזן אחת, בעוד אחרים מקבלים wil האוזן מלוחים. התגובה הדלקתית יהיה גלוי 3-72 שעות לאחר מכן ועובי האוזן תימדד כאינדיקציה לחומרת DTH.
Protocol
Discussion
האתגר antigenic יכול גם להתבצע באתרים אחרים, למשל בעור של הגב (2). עם זאת אנו מוצאים כי מאתגר. באמצעות אפרכסת האוזן, כפי שמוצג בסרטון זה, מאפשר מדידה מדויקת ביותר של תגובת DTH.
Acknowledgements
אנו מודים לד"ר אלכסנדר Flugel (Martinsried, גרמניה) למתן לנו את ה-GFP שכותרתו קו, T ovalbumin ספציפי תא בשימוש בפרוטוקול זה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco/Invitrogen | 12430-062 | 500ml | |
| Sodium pyruvate | Sigma | S8636 | 1 mM final, in Stimulation medium | |
| Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine | Cambrex/BioWhittaker | 17-718R | 100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium | |
| Non essential amino acids | Sigma | R7131 | NEAA, 1% final, in Stimulation Medium | |
| RPMI vitamins | Sigma | R7256 | 1% final, in Stimulation medium | |
| beta-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | 2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium | |
| Syngeneic rat serum | 1% final. See explanation in Protocol. | |||
| Ovalbumin | Sigma | A5503 | 10 µg/ml final, in Stimulation Medium. |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 166-936 (2001).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of active delayed type hypersensitivity (DTH)in rats. J Vis Exp. (5), (2007).
