고양이의 입양 지연 유형 과민성의 유도 및 모니터링

Summary

지연 유형 과민성 (DTH)는 CCR7 – 효과기 기억 T (TEM) lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 여기서 우리는, 항원 특정 TEM 세포를 활성화 루이스 쥐에서 입양 DTH를 유발하고 염증 반응을 모니터링하는 방법을 보여줍니다.

Abstract

지연 유형 과민성 (DTH)은 면역 시스템이 준비하는되어있는 대한 항원의 주사의 사이트를 침투 CCR7 – 효과기 기억 T의 lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 염증 반응은 antigenic 도전의 사이트의 빨갛게과 팽창이 특징입니다. 그것은 면역 억제제의 생체내 효능에 결정하는 편리한 모델입니다. 피부 DTH는 항원에 특정한 T의 lymphocytes의 입양 전송 또는 항원, 그리고 주어진 피부 영역에서 염증 반응을 유발하는 항원과 이후의 intradermal 도전과 적극적인 예방 접종을 통해 유도된 수 있습니다. DTH 반응이 예제 ovalbumin, 투베르쿨린,​​ 파상풍 toxoid, 또​​는 열쇠의 림펫 hemocyanin에 대한 다양한 항원을 유도하실 수 있습니다. 이러한 반응도 MBP 여러 경화증 (1) 동물 모델 실험 면역 encephalomyelitis 유도와 쥐의 기본 단백질 (MBP)을 myelin 예를 들어, autoantigen에 대한 유발 수 있습니다. 여기 루이스 쥐에서 입양 DTH 반응을 유도하는 방법을 보여줍니다. 우리가 먼저 체외에서 ovalbumin 특정 T 세포를 자극하고 순진한 쥐 이러한 활성 셀 intraperitoneally를 삽입합니다. 다른 귀 윌은 생리 수신하는 동안 세포가 2 일간 생체내에서 평형 수있게되면, 우리는 귀 한쪽의 날개에 ovalbumin와 쥐에 도전합니다. 염증 반응이 3~72시간 나중에 표시되며, 귀 두께는 DTH 심각의 표시로 측정됩니다.

Protocol

1. ovalbumin 특정 T의 lymphocytes의 자극 휴식 ovalbumin 특정 T 세포는 자극을 매체 항원 제시 세포 (APCs)로 조사 루이스 랫 thymocytes (30 쥐), (DMEM + 펜 / Strep / L – GLUT + NEAA + RPMI의 비타민 준비의 존재에 ovalbumin로 자극된 상태네 + 2ME + 랫 세럼 + Ovalbumin, 최종 농도에서는 자료 목록에 언급했다.) 쥐 혈청 준비 우리는 thymus 기증자로 희생 쥐의 혈청을. 쥐?…

Discussion

antigenic의 도전도 다시 (2) 피부에 예를 들어, 다른 사이트에서 수행할 수 있습니다. 우리는 그러나 그 도전 찾으십시오. 본 동영상에 표시된 귀의 날개를 사용하면 DTH 반응의 가장 정확한 측정을 위해 수 있습니다.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.