Индукция и мониторинг приемных гиперчувствительности замедленного типа у крыс

Summary

Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторных памяти T (ПЭМ) лимфоцитов. Здесь мы показываем, как активировать антиген-специфические клетки ТЕМ, вызывают приемные DTH у крыс Льюиса и контролировать воспалительную реакцию.

Abstract

Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные Т-лимфоциты памяти, что проникнуть в месте введения антигена, против которого иммунная система была загрунтовать. Воспалительная реакция характеризуется покраснением и отеком сайт антигенный вызов. Это удобная модель для определения в естественных условиях эффективность иммунодепрессанты. Кожные DTH могут быть вызваны либо приемных передачи антиген-специфические Т-лимфоциты или активной иммунизации с антигеном, и последующие внутрикожные проблема с антигеном, чтобы вызвать воспалительную реакцию в данной области кожи. DTH реакции могут быть вызваны на различные антигены, например, яичный альбумин, туберкулин, столбняка, или замочную скважину блюдечко гемоцианин. Такая реакция может быть вызвана против аутоантиген, например к основному белку миелина (ОБМ) у крыс с экспериментальным аутоиммунный энцефаломиелит индуцированной с MBP, животной модели рассеянного склероза (1). Здесь показано, как вызвать приемных DTH реакцию Льюиса крыс. Сначала стимулировать овальбумином специфические клетки Т в пробирке и вводят эти клетки активированы внутрибрюшинно наивному крыс. После учета клетки, чтобы уравновесить в естественных условиях в течение 2 дней, мы будем вызов крыс с овальбумина в ушной раковины на одно ухо, а другой Виль ухо получить физиологический раствор. Воспалительная реакция будет виден 3-72 часов позже, и ухо толщина будет оцениваться как указание DTH тяжести.

Protocol

1. Стимуляция овальбумином конкретные Т-лимфоцитов Отдых овальбумина-специфических Т клетки стимулируются овальбумином в присутствии облученных крыс тимоцитов Льюис (30 Гр), как антиген представляющих клеток (БТР), в Стимуляция среднего (Подготовка в DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA R…

Discussion

Антигенный вызов может также выполняться на других объектах, например, в кожу спины (2). Мы, однако, что сложно. Использование ушной раковины из уха, как показано в этом видео, позволяет наиболее точное измерение DTH реакцию.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.